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gniy

金虫 (初入文坛)

[求助] Q -PCR的NTC老是起来,而且和样本的CT值一样,求解。 已有2人参与

内参基因GAPDH的NTC老是起来,模版是特异性反转的cDNA,结果NTC的CT值和样本的CT值一样,都在28左右,是不是引物和探针污染了,还是样本的cDNA没有用。还是其他啥的。
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hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-09-16 20:18:07
估计是引物二聚体,当然也可能是体系污染。

1、把产物拿去跑个胶看看
2、逐一更换体系的各成分,看是不是体系污染
3、换个基因跑看看
2楼2014-09-16 16:55:27
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gniy

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hlxxym at 2014-09-16 16:55:27
估计是引物二聚体,当然也可能是体系污染。

1、把产物拿去跑个胶看看
2、逐一更换体系的各成分,看是不是体系污染
3、换个基因跑看看

请问一下探针会不会自己水解然后产生荧光信号啊?
3楼2014-09-16 17:15:19
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gniy

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hlxxym at 2014-09-16 16:55:27
估计是引物二聚体,当然也可能是体系污染。

1、把产物拿去跑个胶看看
2、逐一更换体系的各成分,看是不是体系污染
3、换个基因跑看看

不可能是二聚体的。用的是探针法。
4楼2014-09-16 17:16:19
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zycdna

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


gniy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-22 20:01:47
首先你得确定各材料的质量,最好使用知名厂商提供的,并且确保运输及贮存过程中,材料未受到破坏;记得污染无处不在,好的习惯会帮助你成功。。。。
5楼2014-09-22 17:47:42
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gniy

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zycdna at 2014-09-22 17:47:42
首先你得确定各材料的质量,最好使用知名厂商提供的,并且确保运输及贮存过程中,材料未受到破坏;记得污染无处不在,好的习惯会帮助你成功。。。。

谢谢哦
6楼2014-09-23 08:55:13
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