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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Q -PCR的NTC老是起来，而且和样本的CT值一样，求解。
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gniy

金虫 (初入文坛)

[求助] Q -PCR的NTC老是起来，而且和样本的CT值一样，求解。 已有2人参与

内参基因GAPDH的NTC老是起来，模版是特异性反转的cDNA，结果NTC的CT值和样本的CT值一样，都在28左右，是不是引物和探针污染了，还是样本的cDNA没有用。还是其他啥的。
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1楼 2014-09-16 16:30:50
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hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-16 20:18:07
估计是引物二聚体，当然也可能是体系污染。

1、把产物拿去跑个胶看看
2、逐一更换体系的各成分，看是不是体系污染
3、换个基因跑看看
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2楼2014-09-16 16:55:27
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gniy

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hlxxym at 2014-09-16 16:55:27
估计是引物二聚体，当然也可能是体系污染。

1、把产物拿去跑个胶看看
2、逐一更换体系的各成分，看是不是体系污染
3、换个基因跑看看

请问一下探针会不会自己水解然后产生荧光信号啊？
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3楼2014-09-16 17:15:19
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gniy

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hlxxym at 2014-09-16 16:55:27
估计是引物二聚体，当然也可能是体系污染。

1、把产物拿去跑个胶看看
2、逐一更换体系的各成分，看是不是体系污染
3、换个基因跑看看

不可能是二聚体的。用的是探针法。
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4楼2014-09-16 17:16:19
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zycdna

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
gniy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-22 20:01:47
首先你得确定各材料的质量，最好使用知名厂商提供的，并且确保运输及贮存过程中，材料未受到破坏；记得污染无处不在，好的习惯会帮助你成功。。。。
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5楼2014-09-22 17:47:42
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gniy

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zycdna at 2014-09-22 17:47:42
首先你得确定各材料的质量，最好使用知名厂商提供的，并且确保运输及贮存过程中，材料未受到破坏；记得污染无处不在，好的习惯会帮助你成功。。。。

谢谢哦
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6楼2014-09-23 08:55:13
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