24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2763  |  回复: 7

greenygreen

银虫 (小有名气)

[求助] 求助检测基因沉默的qPCR引物设计问题 已有2人参与

看了专门介绍的protocol,要求上下游的引物要跨越siRNA的target位点。但是有的文献上也不是这么设计的,就是还是mRNA的保守位置。因为siRNA切割mRNA之后,随着时间的延长和循环整条mRNA都会降解。所以有点糊涂了,求亲自做过的大神解答。我是细胞转染siRNA之后继续培养24小时,收细胞提总RNA的。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
greenygreen: 金币+2 2014-05-07 20:58:35
可以试试IOS技术直接把沉默的基因敲除
2楼2014-05-07 19:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
greenygreen: 金币+10 2014-05-08 09:23:11
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:19:58
如果是细胞转染siRNA之后,然后检测靶基因的表达,realtime引物可以设计在靶基因的任何位置,因为siRNA会引起靶mRNA的降解而不是翻译的抑制,这一点跟microRNA不同
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-05-08 01:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenygreen

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 01:11:20
如果是细胞转染siRNA之后,然后检测靶基因的表达,realtime引物可以设计在靶基因的任何位置,因为siRNA会引起靶mRNA的降解而不是翻译的抑制,这一点跟microRNA不同

那我就放心了,也就是说,在我的检测时间(转染后24小时),siRNA肯定吧mRNA咔咔都切了是吧,而不仅仅是靶位点的一切为二。
4楼2014-05-08 09:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
greenygreen: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-08 21:12:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by greenygreen at 2014-05-08 09:24:09
那我就放心了,也就是说,在我的检测时间(转染后24小时),siRNA肯定吧mRNA咔咔都切了是吧,而不仅仅是靶位点的一切为二。...

不是靶位点的一切二,siRNA转染24小时后,不是检测干扰的最佳时间,一般36-48h比较合适
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-05-08 14:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenygreen

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 14:28:51
不是靶位点的一切二,siRNA转染24小时后,不是检测干扰的最佳时间,一般36-48h比较合适...

我现在qPCR和western都做,24小时之后检测mRNA,48小时检测蛋白滴。
6楼2014-05-08 21:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by greenygreen at 2014-05-08 21:14:01
我现在qPCR和western都做,24小时之后检测mRNA,48小时检测蛋白滴。...

那也是可以的,可能的话,都在48小时检测比较好
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2014-05-08 21:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenygreen

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 21:33:02
那也是可以的,可能的话,都在48小时检测比较好...

OK
试一试~
8楼2014-05-09 09:06:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greenygreen 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-03 06:34 by jmr1kibhvw
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 05:49 by w5idbsc3mz
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 04:19 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:51 by w5idbsc3mz
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:49 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 02:36 by w5idbsc3mz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-03 02:04 by w5idbsc3mz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 01:34 by w5idbsc3mz
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qs8kylt1wr 2026-05-01 4/200 2026-05-03 00:00 by 火炎焱燚炙烤
[论文投稿] 有人投过CCC中国控制会议吗? 19+3 初九凡 2026-04-26 4/200 2026-05-02 21:11 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:36 by zahslv263y
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:06 by zahslv263y
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:21 by zahslv263y
[考博] 药化及相关博士的申请 5+3 中药学渣 2026-04-29 3/150 2026-05-01 18:14 by babero
[论文投稿] 一篇MDPI论文改变了学习工作和生活 +3 helsinglee 2026-04-29 4/200 2026-05-01 11:45 by bobvan
[有机交流] 一个化合物的合成路线:CAS:367929-02-0 名称:8β-乙烯基雌二醇 50+4 zhquanbing 2026-04-28 4/200 2026-04-30 22:45 by zyqchem
[文学芳草园] 太白金星有点烦 +3 yexuqing 2026-04-27 3/150 2026-04-30 21:56 by myrtle
[考博] 中国地质大学(北京)博士招生补录,数理学院材料科学与工程专业和材料与化工专业 +3 liuxh329 2026-04-29 3/150 2026-04-30 15:42 by 顺利毕业zs
信息提示
请填处理意见