24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2734  |  回复: 7

greenygreen

银虫 (小有名气)

[求助] 求助检测基因沉默的qPCR引物设计问题 已有2人参与

看了专门介绍的protocol,要求上下游的引物要跨越siRNA的target位点。但是有的文献上也不是这么设计的,就是还是mRNA的保守位置。因为siRNA切割mRNA之后,随着时间的延长和循环整条mRNA都会降解。所以有点糊涂了,求亲自做过的大神解答。我是细胞转染siRNA之后继续培养24小时,收细胞提总RNA的。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小刀188

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
greenygreen: 金币+2 2014-05-07 20:58:35
可以试试IOS技术直接把沉默的基因敲除
2楼2014-05-07 19:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
greenygreen: 金币+10 2014-05-08 09:23:11
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-08 19:19:58
如果是细胞转染siRNA之后,然后检测靶基因的表达,realtime引物可以设计在靶基因的任何位置,因为siRNA会引起靶mRNA的降解而不是翻译的抑制,这一点跟microRNA不同
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-05-08 01:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenygreen

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 01:11:20
如果是细胞转染siRNA之后,然后检测靶基因的表达,realtime引物可以设计在靶基因的任何位置,因为siRNA会引起靶mRNA的降解而不是翻译的抑制,这一点跟microRNA不同

那我就放心了,也就是说,在我的检测时间(转染后24小时),siRNA肯定吧mRNA咔咔都切了是吧,而不仅仅是靶位点的一切为二。
4楼2014-05-08 09:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
greenygreen: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-08 21:12:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by greenygreen at 2014-05-08 09:24:09
那我就放心了,也就是说,在我的检测时间(转染后24小时),siRNA肯定吧mRNA咔咔都切了是吧,而不仅仅是靶位点的一切为二。...

不是靶位点的一切二,siRNA转染24小时后,不是检测干扰的最佳时间,一般36-48h比较合适
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-05-08 14:28:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenygreen

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 14:28:51
不是靶位点的一切二,siRNA转染24小时后,不是检测干扰的最佳时间,一般36-48h比较合适...

我现在qPCR和western都做,24小时之后检测mRNA,48小时检测蛋白滴。
6楼2014-05-08 21:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by greenygreen at 2014-05-08 21:14:01
我现在qPCR和western都做,24小时之后检测mRNA,48小时检测蛋白滴。...

那也是可以的,可能的话,都在48小时检测比较好
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2014-05-08 21:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenygreen

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-08 21:33:02
那也是可以的,可能的话,都在48小时检测比较好...

OK
试一试~
8楼2014-05-09 09:06:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greenygreen 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 4/200 2026-04-17 11:18 by czyzsu
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +9 否极泰来2026 2026-04-15 11/550 2026-04-17 11:08 by liuzhexuan12
[考研] 求调剂 +8 小聂爱学习 2026-04-16 10/500 2026-04-16 22:06 by 1shin_ichi
[考研] 307中医考研调剂 +6 于以采蘩 2026-04-14 6/300 2026-04-16 16:20 by qingfeng258
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 297求调剂 +23 ORCHID1 2026-04-10 26/1300 2026-04-14 13:52 by 陈皮皮
[考研] 食品与营养(0955)271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 求调剂,一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 0859,337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
信息提示
请填处理意见