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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液PCR，一样的条件，再也重复不出来正确的结果了
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machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] 菌液PCR，一样的条件，再也重复不出来正确的结果了

以菌液为模板，扩增得到的产物，只有第一次试验做出的产物是正确的，以后再也重复不出来了，左边那些没有非特异性扩增的，最后测序得到的片段都不对，而最后两个泳道的有非特异性扩增的这种情况，回收主条带，测序得到的才是我要的目的片段，况且重复多次了，再也做不出来这种情况了，求各路高人帮忙指点
菌液PCR，一样的条件，再也重复不出来正确的结果了
QQ图片20131111114525.jpg
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1楼 2013-11-11 11:46:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by machao8405 at 2013-11-11 12:01:04
这样解决不了问题，况且菌液直接就能做PCR，为何还要多此一举提质粒呢...

这也不能叫多此一举吧，菌液PCR假阳性率很高。。。
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6楼2013-11-12 09:40:34
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普通回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-11 13:35:31
1 提质粒，PCR
2 重新做转化。
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真相是最大的奢侈品
2楼2013-11-11 11:54:04
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machao8405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2013-11-11 11:54:04
1 提质粒，PCR
2 重新做转化。

这样解决不了问题，况且菌液直接就能做PCR，为何还要多此一举提质粒呢
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3楼2013-11-11 12:01:04
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
非特异性带比特异性带亮的情况我见过，你确定主带就是目的条带吗？
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4楼2013-11-11 15:16:04
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machao8405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2013-11-11 15:16:04
非特异性带比特异性带亮的情况我见过，你确定主带就是目的条带吗？

我确定 因为有marker指示，况且之前我做成功过，测序都正确
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5楼2013-11-11 15:17:12
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Renavatio

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提质粒，PCR不是很容易么？为什么一定要用菌液PCR?
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Undefined！
7楼2013-11-12 12:35:36
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蓝冰天山

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
按上面说的做吧，老纠结这个问题，重复多次没成功，何必，浪费时间

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2013-11-12 13:58:29
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有没有考虑过靶基因的污染？你的测序片段不对是指什么呢？
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学习使你立于不败之地
9楼2013-11-12 16:29:34
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面的是上面的拷贝。。。。。
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10楼2013-11-12 17:03:05
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