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machao8405

木虫 (正式写手)

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[求助] 菌液PCR，一样的条件，再也重复不出来正确的结果了

以菌液为模板，扩增得到的产物，只有第一次试验做出的产物是正确的，以后再也重复不出来了，左边那些没有非特异性扩增的，最后测序得到的片段都不对，而最后两个泳道的有非特异性扩增的这种情况，回收主条带，测序得到的才是我要的目的片段，况且重复多次了，再也做不出来这种情况了，求各路高人帮忙指点

QQ图片20131111114525.jpg

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1楼2013-11-11 11:46:56

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yuren2009

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

有没有考虑过靶基因的污染？你的测序片段不对是指什么呢？

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学习使你立于不败之地

9楼2013-11-12 16:29:34

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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

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专业: 植物遗传学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-11 13:35:31

1 提质粒，PCR
2 重新做转化。

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真相是最大的奢侈品

2楼2013-11-11 11:54:04

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machao8405

木虫 (正式写手)

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专业: 植物学

引用回帖:

2楼: Originally posted by wanhscn at 2013-11-11 11:54:04
1 提质粒，PCR
2 重新做转化。

这样解决不了问题，况且菌液直接就能做PCR，为何还要多此一举提质粒呢

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3楼2013-11-11 12:01:04

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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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专业: 病毒学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

非特异性带比特异性带亮的情况我见过，你确定主带就是目的条带吗？

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4楼2013-11-11 15:16:04

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