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machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] 菌液PCR,一样的条件,再也重复不出来正确的结果了

以菌液为模板,扩增得到的产物,只有第一次试验做出的产物是正确的,以后再也重复不出来了,左边那些没有非特异性扩增的,最后测序得到的片段都不对,而最后两个泳道的有非特异性扩增的这种情况,回收主条带,测序得到的才是我要的目的片段,况且重复多次了,再也做不出来这种情况了,求各路高人帮忙指点
菌液PCR,一样的条件,再也重复不出来正确的结果了
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phoenix211

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
3楼: Originally posted by machao8405 at 2013-11-11 12:01:04
这样解决不了问题,况且菌液直接就能做PCR,为何还要多此一举提质粒呢...

这也不能叫多此一举吧,菌液PCR假阳性率很高。。。
6楼2013-11-12 09:40:34
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-11 13:35:31
1 提质粒,PCR
2 重新做转化。
真相是最大的奢侈品
2楼2013-11-11 11:54:04
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2013-11-11 11:54:04
1 提质粒,PCR
2 重新做转化。

这样解决不了问题,况且菌液直接就能做PCR,为何还要多此一举提质粒呢
3楼2013-11-11 12:01:04
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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非特异性带比特异性带亮的情况我见过,你确定主带就是目的条带吗?
4楼2013-11-11 15:16:04
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2013-11-11 15:16:04
非特异性带比特异性带亮的情况我见过,你确定主带就是目的条带吗?

我确定 因为有marker指示,况且之前我做成功过,测序都正确
5楼2013-11-11 15:17:12
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Renavatio

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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提质粒,PCR不是很容易么?为什么一定要用菌液PCR?
Undefined!
7楼2013-11-12 12:35:36
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蓝冰天山

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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按上面说的做吧,老纠结这个问题,重复多次没成功,何必,浪费时间

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2013-11-12 13:58:29
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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有没有考虑过靶基因的污染?你的测序片段不对是指什么呢?
学习使你立于不败之地
9楼2013-11-12 16:29:34
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
下面的是上面的拷贝。。。。。
10楼2013-11-12 17:03:05
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