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ILKOBE

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我当时也是 RFLP做的好好的 中间隔了几天 PCR都扩不出来了
11楼2012-05-05 19:58:49
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mamadexiao

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by post_ngao at 2012-05-04 15:52:39:
看你要干什么,如果只是为了检测,没有后续工作,可以使用extaq或者LA taq。但是说心里话,我用了5、6年的感觉就是这两种酶都垃圾得很!耽误了我数不清的时间。

如果你们实验室有钱,我推荐你买TAKARA的Primes ...

这个PRIMERSTAR不好用。。。我的3kb+的片段依旧扩不出来。。。
12楼2012-05-06 22:03:16
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+3, 谢谢参与 2012-05-07 16:48:10
不知楼主扩增体系怎么样,dNTP的量,模板浓度等对扩增效率影响很大,模板浓度(10ul体系中20ng基因组量最佳,大于100就扩不出来了)或dNTP浓度过大可能直接导致扩不出来,我用takra的LA酶扩6k多的片段一点问题都没有,只不多要摸好体系,祝好运!
13楼2012-05-07 08:55:17
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amilie030312

金虫 (正式写手)

换一家公司的酶吧,别再纠结了
14楼2012-05-07 13:42:56
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

谢谢楼上,终究还是重复出来了,谢谢ls各位啊

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

15楼2012-05-07 22:05:07
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pinghang0716

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by xzx018 at 2012-05-07 22:05:07
谢谢楼上,终究还是重复出来了,谢谢ls各位啊

是怎么弄出来的?我也一直重复不出来,很郁闷。。
16楼2012-09-28 09:06:46
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by pinghang0716 at 2012-09-28 09:06:46
是怎么弄出来的?我也一直重复不出来,很郁闷。。...

现在感觉模板太重要了,反复冻融对模板伤害很大,而且刚开始提的基因组要亮才行
17楼2012-09-28 18:55:05
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budinggguodu

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本人新人。
我也真心觉得PCR特别没准啊 有时候换了模板浓度 引物浓度 结果都可能变化 楼主的情况我刚经历过 亲身体会啊! 同源克隆确实好没准啊。。。。建议楼主再优化一下温度?或者 换个PCR仪试试?还有就是模板、引物、这些东西过了那么久还真没准就有变化了 效率就没那么高了。反正 PCR克隆基因真心是试出来的 楼主好运!
18楼2013-01-19 15:46:54
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x452659189

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我想借楼主的话强调一句,做pcr模板是第一重要的,至于退火温度,taq酶种类,都是次要的。
19楼2013-01-19 21:03:16
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by x452659189 at 2013-01-19 21:03:16
我想借楼主的话强调一句,做pcr模板是第一重要的,至于退火温度,taq酶种类,都是次要的。

确实深刻体会到了这句话
20楼2013-01-19 21:50:11
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