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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] PCR重复不出来已有15人参与

]这个是五一前做的一次pcr,条带也不怎么亮,用的是简并引物,3000bp处是我要的,当时三个平行出来了一个,五一回来就做不出来了,用pcr产物p也p不出来,用基因组也p不出来,基本上条件都没怎么变,求助下面该怎么做,还有这几次做的下面的引物二聚体要比五一前的这次亮一些,但是上面就是没条带,伤不起的劳动节啊


[ Last edited by xzx018 on 2012-5-4 at 10:25 ]
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budinggguodu

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本人新人。
我也真心觉得PCR特别没准啊 有时候换了模板浓度 引物浓度 结果都可能变化 楼主的情况我刚经历过 亲身体会啊! 同源克隆确实好没准啊。。。。建议楼主再优化一下温度?或者 换个PCR仪试试?还有就是模板、引物、这些东西过了那么久还真没准就有变化了 效率就没那么高了。反正 PCR克隆基因真心是试出来的 楼主好运!
18楼2013-01-19 15:46:54
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看天: 金币+2, 鼓励 常来 2012-05-04 17:55:12
换个酶把。TAKARA的LA酶用于扩增3K以上的片段效果还可以。
2楼2012-05-04 12:42:53
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by skkyy88888 at 2012-05-04 12:42:53:
换个酶把。TAKARA的LA酶用于扩增3K以上的片段效果还可以。

这个是用extaq扩的,takara的,说明书上写的是可以扩长片段。换了康为世纪的LA酶做,连条带都没有,很是郁闷
3楼2012-05-04 14:30:32
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
silicare: 金币+1, 蛋疼的MM不多见,安慰一下 2012-05-07 16:46:52
一样遭遇的经过

还在蛋疼中  T T
会不会偶尔也会想起我....
4楼2012-05-04 15:38:10
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