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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR条件摸索（产物长度在1100BP）
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007TNT

木虫 (小有名气)

scientific businessor

[交流] PCR条件摸索（产物长度在1100BP） 已有9人参与

各位大侠：


              请问我的产物长度在1100BP以上，该用多久的延伸时间呢？循环应该怎样才能跑出条带呢？


                 谢谢了。。
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为祖国的科研事业献身！
1楼 2012-04-23 23:10:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wushuwei1104

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-24 13:46:47
一般1100bp大小的产物产物退火1分钟就差不多了，如果2000bp的话可能就要90秒了，我们这PCR产物1100bp左右的话就退火1分钟。（94℃ 2分钟，94℃30秒 退火温度30秒 72度1分钟，72℃10分钟）。
退火温度的话可能需要条件摸索，不妨做个温度梯度，但经验上退火温度是你引物合成单上标明的退火温度稍微低2℃。
循环数的话一般35个循环，跑胶观察，条带太亮可适当降低循环数，条带暗的话可适当增加循环数。
呵呵，试试吧！！祝君好运！
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勤能补拙
3楼2012-04-24 10:04:32
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普通回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)
延伸一般1min左右吧，
至于退火温度等等具体这个要自己摸索
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2楼2012-04-24 04:51:18
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damaomao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
4楼2012-04-24 10:54:11
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kod的话，1000bp／20s，请参考你自己的酶说明书。
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活着就要让人感受到你的存在。
5楼2012-04-24 11:47:29
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moucheng

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般pcr用的Taq酶都有说明延伸速度。
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人活在世界上不容易，凡事多看开些，开开心心，快快乐乐，健康长寿
6楼2012-04-24 14:17:51
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007TNT

木虫 (小有名气)

scientific businessor
引用回帖:
3楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-04-24 07:04:32:
一般1100bp大小的产物产物退火1分钟就差不多了，如果2000bp的话可能就要90秒了，我们这PCR产物1100bp左右的话就退火1分钟。（94℃ 2分钟，94℃30秒 退火温度30秒 72度1分钟，72℃10分钟）。
退火温度的话可能需要 ...

很详细，谢谢啊
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7楼2012-04-25 22:41:30
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007TNT

木虫 (小有名气)

scientific businessor
引用回帖:
4楼: Originally posted by damaomao at 2012-04-24 07:54:11:
延伸时间用90秒，对应的退火温度可以设几个梯度

嗯，谢谢你的建议
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8楼2012-04-25 22:42:45
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xudabin98

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-27 13:33:43
这个你要参照你用的酶，每秒钟能够延伸多少个碱基，然后就可以算出你的退火温度了，要是不放心，可以80S，普通PCR是个很“贱”的实验，随便做做就可以做出来了。
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9楼2012-04-26 13:22:51
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sincerewei

铁杆木虫 (著名写手)
内容已删除
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10楼2012-04-26 13:54:19
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