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007TNT

木虫 (小有名气)

scientific businessor

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专业: 动物系统及分类学

[交流] PCR条件摸索（产物长度在1100BP）已有9人参与

各位大侠：

请问我的产物长度在1100BP以上，该用多久的延伸时间呢？循环应该怎样才能跑出条带呢？

谢谢了。。

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1楼2012-04-23 23:10:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wushuwei1104

银虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-24 13:46:47

一般1100bp大小的产物产物退火1分钟就差不多了，如果2000bp的话可能就要90秒了，我们这PCR产物1100bp左右的话就退火1分钟。（94℃ 2分钟，94℃30秒退火温度30秒 72度1分钟，72℃10分钟）。
退火温度的话可能需要条件摸索，不妨做个温度梯度，但经验上退火温度是你引物合成单上标明的退火温度稍微低2℃。
循环数的话一般35个循环，跑胶观察，条带太亮可适当降低循环数，条带暗的话可适当增加循环数。
呵呵，试试吧！！祝君好运！