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007TNT木虫 (小有名气)
scientific businessor
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[交流]
PCR条件摸索（产物长度在1100BP） 已有9人参与
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各位大侠： 请问我的产物长度在1100BP以上，该用多久的延伸时间呢？循环应该怎样才能跑出条带呢？ 谢谢了。。 |
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5楼2012-04-24 11:47:29
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-24 13:46:47
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-24 13:46:47
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一般1100bp大小的产物产物退火1分钟就差不多了，如果2000bp的话可能就要90秒了，我们这PCR产物1100bp左右的话就退火1分钟。（94℃ 2分钟，94℃30秒 退火温度30秒 72度1分钟，72℃10分钟）。 退火温度的话可能需要条件摸索，不妨做个温度梯度，但经验上退火温度是你引物合成单上标明的退火温度稍微低2℃。 循环数的话一般35个循环，跑胶观察，条带太亮可适当降低循环数，条带暗的话可适当增加循环数。 呵呵，试试吧！！祝君好运！  |
3楼2012-04-24 10:04:32
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4楼2012-04-24 10:54:11
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