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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么PCR扩增出来使这个样子，各位高手帮忙支招吧！
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wangning__

木虫 (正式写手)

[求助] 为什么PCR扩增出来使这个样子，各位高手帮忙支招吧！

古菌槽式扩增，以全长的50，100，150，200稀释为模版，得到下面的图，为什么有杂带，后来提高退火温度2℃，4℃，延伸时间缩短15s，20s，还是这个样子，换了新的体系试剂还是没有消除，这是什么原因呢？
PS：引物为109/1510;109/515，扩增产物用于DGGE

求求各位大侠给支个招吧，小妹实在是找不出原因了。

2000的marker,分别为全长扩增产物稀释50倍，100，150，200倍，其它条件一致
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乌拉拉
1楼 2012-08-04 10:38:25
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wangning__

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by sd3824289 at 2012-08-07 09:26:53
建议楼主做个温度梯度试试，我筛选条件的时候都是用这个方法，很好的！基本上做一次就知道最适退火温度了，一般情况下，如果两次PCR用到得酶不一样，也会导致在相同的退火温度下得到不一样的结果！模板浓度如果高， ...

恩，那我试试，多谢指点，没有金币了，送你朵小红花表示感谢！
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乌拉拉
13楼2012-08-09 11:12:03
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zhsDONG

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wangning__: 金币+1 2012-08-05 09:23:34
可能是引物的特异性不是很强
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2楼2012-08-04 14:33:48
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangning__: 金币+3 2012-08-05 09:24:01
减少pcr循环数和模版量试一下。除了引物的可能行外，也有可能是模版质量不好，有降解。
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3楼2012-08-04 21:18:12
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eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wangning__: 金币+1 2012-08-05 09:24:13
也可以试试 用PCR产物稀释100倍后作为模板再扩增看还有没有杂带
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4楼2012-08-04 22:00:14
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