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wangning__木虫 (正式写手)
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[求助]
为什么PCR扩增出来使这个样子，各位高手帮忙支招吧！
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古菌槽式扩增，以全长的50，100，150，200稀释为模版，得到下面的图，为什么有杂带，后来提高退火温度2℃，4℃，延伸时间缩短15s，20s，还是这个样子，换了新的体系试剂还是没有消除，这是什么原因呢？ PS：引物为109/1510;109/515，扩增产物用于DGGE 求求各位大侠给支个招吧，小妹实在是找不出原因了。  2000的marker,分别为全长扩增产物稀释50倍，100，150，200倍，其它条件一致 |
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sd3824289
木虫 (正式写手)
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验 2012-08-07 15:37:57
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| 建议楼主做个温度梯度试试，我筛选条件的时候都是用这个方法，很好的！基本上做一次就知道最适退火温度了，一般情况下，如果两次PCR用到得酶不一样，也会导致在相同的退火温度下得到不一样的结果！模板浓度如果高，建议加0.5μl就够了，如果浓度不高，就得加1μL，引物浓度应该都是10MM！祝楼主好运！ |
wangning__10楼2012-08-07 09:26:53
2楼2012-08-04 14:33:48
3楼2012-08-04 21:18:12
eagles123
金虫 (正式写手)
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4楼2012-08-04 22:00:14