应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr的温度及时间的选择
91/1返回列表
查看: 3373  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

贝壳v下了

铜虫 (初入文坛)

[求助] pcr的温度及时间的选择

各位大侠，水稻叶片的DNA做pcr的一些问题。我的片段长度是600至800bp的样子   1、请问变性温度，退火温度，延伸温度是多少 ？  2、请问变性时间，退火时间，延伸时间是多久？  3、请问应跑多少个循环比较合适，还有第一个步骤的温度和时间是怎样的，以及最后一个步骤的温度及时间是怎样的  4、在跑电泳时电压，电流，功率，及时间怎样才合适，我跑的是聚丙烯酰胺凝胶电泳。
望请各位大侠多多指教，感激不尽。
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

贝壳v下了

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
专心科研
1楼 2012-11-30 08:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
……变性温度一般94或者95，退火这个没办法回答你，看你的引物，延伸温度72，相关的时间你随便找一篇文献都有吧…………冒昧的说，我觉得你问的这些东西随便搜搜就有了……
赞一下(1人) 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-11-30 09:49:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的问题太多了
这到底是你的实验，还是俺们的实验？！
我这先回答你第一个问题：
变性温度一般是95°-98°（查生化书、基因工程操作原理等书可知）；退火温度、延生温度，看你用的酶的说明书，可知。
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-30 10:20:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度得看 引物上面的Tm-5度，一般都是25到40个循环
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-30 10:25:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
变性和延伸温度都可以固定用，分别是94和72。退火温度根据你引物的情况确定的。跑胶的设定参考文献都有，自己可以查到。自己先搜一下还是应该的，呵呵呵。
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-30 10:35:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝壳v下了

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangqi20092 at 2012-11-30 10:35:45
变性和延伸温度都可以固定用，分别是94和72。退火温度根据你引物的情况确定的。跑胶的设定参考文献都有，自己可以查到。自己先搜一下还是应该的，呵呵呵。

好的，谢谢啊，我找找看看
赞一下 回复此楼
专心科研
6楼2012-11-30 20:37:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

z25935475

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看看你的酶1min能延伸多少bp 设置相应的延伸时间就行了，说明书上都有，看看你的buffer 是 mg plus 还是free的 如果是free的一般都会有氯化镁附带的，看看你要的浓度
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-01 00:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝壳v下了

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
\(^o^)/~，我都不知道怎么才能知道我的酶1min能延伸多少bp，呵呵太水啦。
赞一下 回复此楼
专心科研
8楼2012-12-01 08:20:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongzifan812

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般都是要看你的酶 的说明书，现在国内试剂公司都在说明书里注明了温度，对应1Kb的延伸时间，不一样的酶自然就不一样
赞一下 回复此楼
9楼2013-02-19 00:02:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 贝壳v下了 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕求调剂 +3 太想进步了0608 2026-03-16 3/150 2026-03-16 13:46 by houyaoxu
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +4 Liwangman 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:01 by wang_dand
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 309求调剂 +4 花与叶@ 2026-03-10 4/200 2026-03-14 21:26 by a不易
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[基金申请] 面上和青基一样限30页不合理 +5 wowsunflower 2026-03-10 7/350 2026-03-14 17:21 by kingkocxr
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭