应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR中退火温度的选择
121/2返回列表12下一页
查看: 3088  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wtery

木虫 (正式写手)

[交流] PCR中退火温度的选择 已有11人参与

在合成的报告单中写着
一条是
Tm（1M Na+） 64.9
Tm（50nM Na+） 43.3
另一条是
Tm（1M Na+） 66.8
Tm（50nM Na+） 45.2
软件推荐的是 55.3
我应该怎么选择退火温度
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-01 15:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wuwangqiao

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也做过，一般订回来的引物那就是在上下游tm值的平均数减去5就是最佳tm值，这个值上做个梯度左右波动！！看看选择最佳的退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2012-08-04 15:51:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jl860822

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物合成单上普遍偏高，而且要看你有没有加酶切位点，如果加了，肯定偏高，你先试一下55吧，或者直接做Touchdown
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-01 19:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chiden

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-04 14:03:04
Tm（50nM Na+） 45.2
上调十度左右左PCR合适，个人觉得有时候没必要去纠结这么多，直接做吧，能做出来就好。
各种软件计算Tm的方式有点小差异，要找到的根本才能更好的分析吧
赞一下 回复此楼
即使难过，也要微笑着走下去
3楼2012-08-02 08:43:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王贤卓
4楼2012-08-02 08:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花素馨

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-02 15:33:05
为什么不做一个退火温度的梯度？我们用的是伯乐PCR仪，里面自带退火温度梯度选择功能，就是你设定一个温度范围，比如说53~63°C，然后系统自动给出一个8个梯度的不同温度，然后你可以全做，也可以选择几个你大概推测合适的温度做PCR，这样结果出来不是更准确么？
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-02 09:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupac225

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
上下游tm值的平均数减去5就是最佳tm值。
赞一下 回复此楼
coasttocoast。
6楼2012-08-02 10:31:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damaomao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
7楼2012-08-04 11:12:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jxm520zyc

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还是做个梯度PCR摸索一个适合的温度吧~
赞一下 回复此楼
学习中~
8楼2012-08-04 13:44:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青梅煮酒17

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同意楼上观点。我也是这么做的。
赞一下 回复此楼
10楼2012-08-07 23:33:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wtery 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭