24小时热门版块排行榜    

查看: 3210  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wtery

木虫 (正式写手)

[交流] PCR中退火温度的选择 已有11人参与

在合成的报告单中写着
一条是
Tm(1M Na+) 64.9
Tm(50nM Na+) 43.3
另一条是
Tm(1M Na+) 66.8
Tm(50nM Na+) 45.2
软件推荐的是 55.3
我应该怎么选择退火温度
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jxm520zyc

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
还是做个梯度PCR摸索一个适合的温度吧~
学习中~
8楼2012-08-04 13:44:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

jl860822

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物合成单上普遍偏高,而且要看你有没有加酶切位点,如果加了,肯定偏高,你先试一下55吧,或者直接做Touchdown
2楼2012-08-01 19:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chiden

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-04 14:03:04
Tm(50nM Na+) 45.2
上调十度左右左PCR合适,个人觉得有时候没必要去纠结这么多,直接做吧,能做出来就好。
各种软件计算Tm的方式有点小差异,要找到的根本才能更好的分析吧
即使难过,也要微笑着走下去
3楼2012-08-02 08:43:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花素馨

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-02 15:33:05
为什么不做一个退火温度的梯度?我们用的是伯乐PCR仪,里面自带退火温度梯度选择功能,就是你设定一个温度范围,比如说53~63°C,然后系统自动给出一个8个梯度的不同温度,然后你可以全做,也可以选择几个你大概推测合适的温度做PCR,这样结果出来不是更准确么?
5楼2012-08-02 09:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 05:13 by winsaint
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +11 晴天加油 2026-08-26 12/600 2026-08-28 01:22 by li09465290@
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 XLGfUIdOmEAO 2026-08-27 3/150 2026-08-28 00:49 by 3RAFyYXYSwGS
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 XLGfUIdOmEAO 2026-08-27 4/200 2026-08-27 22:26 by 3RAFyYXYSwGS
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +7 苏东坡二世 2026-08-23 7/350 2026-08-27 18:14 by 瞬息宇宙
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见