24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
查看: 2597  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wtery

木虫 (正式写手)

[交流] PCR中退火温度的选择已有11人参与

在合成的报告单中写着
一条是
Tm(1M Na+) 64.9
Tm(50nM Na+) 43.3
另一条是
Tm(1M Na+) 66.8
Tm(50nM Na+) 45.2
软件推荐的是 55.3
我应该怎么选择退火温度
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuwangqiao

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也做过,一般订回来的引物那就是在上下游tm值的平均数减去5就是最佳tm值,这个值上做个梯度左右波动!!看看选择最佳的退火温度
9楼2012-08-04 15:51:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

jl860822

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物合成单上普遍偏高,而且要看你有没有加酶切位点,如果加了,肯定偏高,你先试一下55吧,或者直接做Touchdown
2楼2012-08-01 19:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chiden

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-04 14:03:04
Tm(50nM Na+) 45.2
上调十度左右左PCR合适,个人觉得有时候没必要去纠结这么多,直接做吧,能做出来就好。
各种软件计算Tm的方式有点小差异,要找到的根本才能更好的分析吧
即使难过,也要微笑着走下去
3楼2012-08-02 08:43:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花素馨

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-02 15:33:05
为什么不做一个退火温度的梯度?我们用的是伯乐PCR仪,里面自带退火温度梯度选择功能,就是你设定一个温度范围,比如说53~63°C,然后系统自动给出一个8个梯度的不同温度,然后你可以全做,也可以选择几个你大概推测合适的温度做PCR,这样结果出来不是更准确么?
5楼2012-08-02 09:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见