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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr的温度及时间的选择
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贝壳v下了

铜虫 (初入文坛)

[求助] pcr的温度及时间的选择

各位大侠，水稻叶片的DNA做pcr的一些问题。我的片段长度是600至800bp的样子   1、请问变性温度，退火温度，延伸温度是多少 ？  2、请问变性时间，退火时间，延伸时间是多久？  3、请问应跑多少个循环比较合适，还有第一个步骤的温度和时间是怎样的，以及最后一个步骤的温度及时间是怎样的  4、在跑电泳时电压，电流，功率，及时间怎样才合适，我跑的是聚丙烯酰胺凝胶电泳。
望请各位大侠多多指教，感激不尽。
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贝壳v下了

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专心科研
1楼 2012-11-30 08:15:07
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

喵星人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度得看 引物上面的Tm-5度，一般都是25到40个循环
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4楼2012-11-30 10:25:08
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
……变性温度一般94或者95，退火这个没办法回答你，看你的引物，延伸温度72，相关的时间你随便找一篇文献都有吧…………冒昧的说，我觉得你问的这些东西随便搜搜就有了……
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-11-30 09:49:17
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czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的问题太多了
这到底是你的实验，还是俺们的实验？！
我这先回答你第一个问题：
变性温度一般是95°-98°（查生化书、基因工程操作原理等书可知）；退火温度、延生温度，看你用的酶的说明书，可知。
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3楼2012-11-30 10:20:38
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wangqi20092

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
变性和延伸温度都可以固定用，分别是94和72。退火温度根据你引物的情况确定的。跑胶的设定参考文献都有，自己可以查到。自己先搜一下还是应该的，呵呵呵。
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5楼2012-11-30 10:35:45
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