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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢，P出来一次之后就P不出来了
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:46:22
引用回帖:
7楼: Originally posted by liuqingrui5 at 2013-12-30 21:04:49
我就是用的最普通的taq酶(rTaq),这种酶扩增出来的产物错误率会不会比较高，如果再以PCR产物为模板会不会得到的序列和真实序列不一致？...

这得看你的需要扩增的基因大小了，不过rTaq确实保真性不高，不建议你用PCR产物做模板P，很有可能就把突变片段给放大了，不过你现在关键是P都P不出来了，用你P的产物来做模板，其他条件和以前P的一样，这实际就是验证你P不出来条带是不是模板的问题~如果你用PCR产物P出来而用原来的模板P不出来那就说明你原来的模板可能出问题啦~并不一定是让你回收连T载体的
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liuqingrui5
大家相互帮助哈
11楼2013-12-30 21:50:45
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liuqingrui5

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by guanfeifei at 2013-12-30 21:38:58
我也是只有taq酶的，偶尔有一次P出来就像中奖似的。。。真让人发疯，好好总结经验，唉！

那你现在怎么办呢
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12楼2013-12-30 21:59:14
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liuqingrui5

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-30 21:50:45
这得看你的需要扩增的基因大小了，不过rTaq确实保真性不高，不建议你用PCR产物做模板P，很有可能就把突变片段给放大了，不过你现在关键是P都P不出来了，用你P的产物来做模板，其他条件和以前P的一样，这实际就是验 ...

哦 懂了   非常感谢  PCR产物做模板的时候需要稀释么？还是直接加就好了？
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13楼2013-12-30 22:01:34
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guanfeifei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by liuqingrui5 at 2013-12-30 21:59:14
那你现在怎么办呢...

我主攻方向不是基因那方面的，偶尔给课题组的小伙伴们做菌种鉴定，暂时就是一遍遍的做，做不出来就放弃了。。。以后有时间去别的课题组多交流学习下

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14楼2013-12-30 22:04:15
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luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by liuqingrui5 at 2013-12-30 22:01:34
哦 懂了   非常感谢  PCR产物做模板的时候需要稀释么？还是直接加就好了？...

50ul体系加1ul就足够啦~
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大家相互帮助哈
15楼2013-12-30 22:04:16
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三蛰

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liuqingrui5 at 2013-12-30 21:04:49
我就是用的最普通的taq酶(rTaq),这种酶扩增出来的产物错误率会不会比较高，如果再以PCR产物为模板会不会得到的序列和真实序列不一致？...

保真性不高。
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我不会！
16楼2014-01-02 22:03:14
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)
遇到过这样的问题，后来一直没解决，祝楼主好运
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17楼2014-01-03 10:52:28
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PCR现在已经是很成熟的技术，多考虑实验的中的可变因素，同时要避免实验中的惯性误操作。
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18楼2014-01-03 15:01:12
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lihaokkkk

新虫 (初入文坛)
gyesang: 屏蔽内容 2014-01-29 17:24:20
本帖内容被屏蔽
19楼2014-01-03 16:00:43
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zhangquan084

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以设计简并引物啊。
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生而不息，奋斗不止！
20楼2014-01-03 16:03:02
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