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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么同样的PCR条件结果重复不出来呢，P出来一次之后就P不出来了
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纤纤陌上尘

木虫 (小有名气)
请问楼主后来是怎么解决的，我也遇到了同样的问题，现在各种做对照找原因，还没找到
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21楼2014-09-24 17:06:44
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fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我前两天也遇到了同样的问题   用rTaq酶，跑的温度梯度确定最适温度，六个基因全都跑出来了，最适温度也确定了。然后准备PCR，跑胶切胶回收的时候怎么也跑不出来，换了ExTaq也没跑出来。正好有点库存的LA Taq酶，六个基因在rTaq酶确定的最适温度里用LA全跑出来了。怪哉！
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22楼2014-09-24 19:13:02
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-24 19:13:02
我前两天也遇到了同样的问题   用rTaq酶，跑的温度梯度确定最适温度，六个基因全都跑出来了，最适温度也确定了。然后准备PCR，跑胶切胶回收的时候怎么也跑不出来，换了ExTaq也没跑出来。正好有点库存的LA Taq酶，六 ...

你好大神！我最近也是被同样问题困扰，关键是我电泳跑出条带来了，但片段大小不对，应该在15kb左右，我P了个4kb的，送去测序也没测出来。这种情况下，还需要做温度梯度PCR吗？
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天生自弃难丽质
23楼2015-04-20 14:36:11
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