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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 环状基因组的PCR
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dreamswing

木虫 (小有名气)

[求助] 环状基因组的PCR

各位高手，环状的基因组DNA做PCR要不要酶切之后在做PCR，这个基因组比较大，约有770k,而且GC含量较高。此外还有什么其他注意事项，望得到大家指导
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宁静以致远
1楼 2011-11-25 17:26:41
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xuwei119

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

细菌不都是环状基因组么，菌落PCR都做了，还切什么啊
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5楼2011-11-30 15:05:06
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励积极应助！ 2011-11-25 18:40:37
切开来做PCR比环状的时候扩增效率要高。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-11-25 17:55:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 同意，我一般也不酶切！ 2011-11-25 21:29:23
个人觉得没必要切开吧，我就经常用环状质粒当模板扩增，基本不存在什么问题。大肠杆菌基因组也是个环状的，扩增时稀释下梯度扩增也没有什么问题。
如果你真要切开的话，怎么用酶也是个问题。
另外，个人认为还是先设计引物扩增试试吧，做之前做好充分准备是对的，但也不要没做就担心很多问题。
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Thank-you，so-blue.
3楼2011-11-25 18:47:49
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foreverjohn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主用神马方法能提取到完整的未断裂的环状基因组，据我所知，一般的提取方法得到肯定是断裂的基因组，所以根本无所谓环状了，并且酶切选得不好，在你的片段上正好有切点，就可能扩不出来了，其实基因组上扩增基因很容易的，关键是引物设计，可以先扩增比目的片段长一点的，然后再用引物扩增目的片段。
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4楼2011-11-27 12:34:07
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