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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 合成一段DNA的问题？引物，PCR
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 合成一段DNA的问题？引物，PCR

想合成一段双链的DNA，大概50个BP，好像公司合的话价格稍高。
想设计成两段引物，想问下如果是两段互补DNA双链的话可以利用一定条件直接使其结合成双链吗？或是设计成两段有重叠的引物，互为模板，是否可行呢？条件大概怎么控制？
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1楼 2012-02-11 11:55:13
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AnaSequence

金虫 (小有名气)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-02-11 13:33:32:
可以合成两段寡核苷酸单链（加上酶切位点），加上退火缓冲液后从94度降温到退火温度，连到载体上转化大肠杆菌，测序验证，可以引入新的酶切位点等。

有些钱不能省的。至少要像这个专家说的做。小片段最好不要再做延伸了，直接合成两条链变性退火形成酶切位点的，退火后就连接吧。再加入其它对连接而言是杂质的试剂就要纯化，小片段很不好纯化的。
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8楼2012-02-11 20:52:48
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
重叠延伸应该可行吧
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loveskyzhou
2楼2012-02-11 12:13:55
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wanhscn

木虫 (职业作家)
★
loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
运气好的话，理论上可行！
运气不好，还是得不到你想要的。
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3楼2012-02-11 13:08:15
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by joan198108 at 2012-02-11 12:13:55:
重叠延伸应该可行吧

重叠延伸就是两段引物重叠相互P吧，可是这样做的话很难找到合适的Tm值啊，如果重叠过长Tm太高怎么P ？ 段的话又怕P不出来。。。。。
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4楼2012-02-11 13:29:57
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