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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何确定未知内切酶的位点
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rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] 如何确定未知内切酶的位点

各位大侠，小女子有一个内切酶，想做实验考察它的酶切位点，不知道有什么好方法，看文献有一个什么Maxam-Gilbert方法，但不是很明白，不知道谁可以帮帮我啊？或者还有什么别的好方法。。。。。谢谢

[ Last edited by 西瓜 on 2011-11-25 at 16:06 ]
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1楼 2011-11-23 15:57:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
帮顶~
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2楼2011-11-23 20:26:52
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保护你的大树

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

没有听懂你的意思，你的意思是说你现在有个酶但是不知道是什么酶，需要进行酶切验证还是你已经知道这是个什么酶，想晓得它的酶切位点的碱基，你说明白点。
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3楼2011-11-24 00:11:28
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liaojianglin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是啊！问题不是很明确
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4楼2011-11-24 10:28:18
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rainontime

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 保护你的大树 at 2011-11-24 00:11:28:
没有听懂你的意思，你的意思是说你现在有个酶但是不知道是什么酶，需要进行酶切验证还是你已经知道这是个什么酶，想晓得它的酶切位点的碱基，你说明白点。

是想知道酶切位点的碱基
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5楼2011-11-24 10:56:49
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保护你的大树

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by rainontime at 2011-11-24 10:56:49:
是想知道酶切位点的碱基

酶切位点的碱基你直接在网上搜就知道了，我这里也有。
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  • 附件 1 : 各种酶的保护碱基.doc
    • 2011-11-24 20:57:14, 60.5 K
6楼2011-11-24 20:57:19
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rainontime

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 保护你的大树 at 2011-11-24 20:57:19:
酶切位点的碱基你直接在网上搜就知道了，我这里也有。

我不知道是什么酶，要做实验找酶切位点的碱基。。。。。。
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7楼2011-11-25 09:17:42
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 个人也觉得可行啊~ 2011-11-25 16:00:53
rainontime(金币+5): 2011-11-28 14:26:39
如果你确定你这种酶为限制性内切酶，而你只是想知道它的酶切位点的碱基的话，我觉得你是不是可以酶切之前的测序，然后酶切后的片段测序，然后比较下应该能知道在那里进行酶切的吧？个人观点哈~~
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
8楼2011-11-25 10:59:18
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rainontime

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-25 10:59:18:
如果你确定你这种酶为限制性内切酶，而你只是想知道它的酶切位点的碱基的话，我觉得你是不是可以酶切之前的测序，然后酶切后的片段测序，然后比较下应该能知道在那里进行酶切的吧？个人观点哈~~

那测序是不是要扩增啊？我都不知道切在哪里，是不是没法试剂引物扩增啊？
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9楼2011-11-25 14:23:44
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流~ 2011-11-25 16:01:43
引用回帖:
1楼: Originally posted by rainontime at 2011-11-23 15:57:05:
各位大侠，小女子有一个内切酶，想做实验考察它的酶切位点，不知道有什么好方法，看文献有一个什么Maxam-Gilbert方法，但不是很明白，不知道谁可以帮帮我啊？或者还有什么别的好方法。。。。。谢谢

酶是商品化的么？ 很珍贵？ 什么都不知道的话用什么样的体系做酶切
我觉得基本上这个很难 特别是有些酶切位点是甲基化之类的
还是先知道下你心里大概的范围 然后扩几个PCR产物 含有怀疑的酶切位点 像做RFLP那样试试
静待高手
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10楼2011-11-25 15:20:09
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