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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何确定未知内切酶的位点
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): good!鼓励交流! 2011-11-27 11:18:00
引用回帖:
8楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-25 10:59:18:
如果你确定你这种酶为限制性内切酶，而你只是想知道它的酶切位点的碱基的话，我觉得你是不是可以酶切之前的测序，然后酶切后的片段测序，然后比较下应该能知道在那里进行酶切的吧？个人观点哈~~

那我想问问你这种酶是咋过弄出来的！你弄到这种酶肯定知道有关它的信息吧？~我个人感觉还有一种方法就是吧大多数酶的酶切位点进行下分析，然后把酶切的序列连在一起，人工合成一段DNA序列，这样你的引物就好设计了！然后再用你的酶去切！只有四种碱基，要合成的DNA也应该不是很长，4的4次方吧？纯属个人观点哈！~~海涵哈~~~
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
11楼2011-11-25 16:45:36
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-27 11:17:45
多整点底物来切，片段够了就可以测序啦，我瞎说的，不知道可行否
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
12楼2011-11-25 20:59:09
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励新虫多发贴！鼓励多来分子生物版！ 2011-11-27 16:14:54
额，酶也不是很贵，不行买个得了，干嘛废那事情
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13楼2011-11-27 11:41:05
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chenchuan24891

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

理论上7楼说的是可以的，但是正如9楼所说的一样，楼主对你的酶都完全不了解，所以反应体系也确定不了，那你也不好找合适的片段来进行酶切，如果楼主有兴趣的话是可以试一下，反正也不知道是什么酶，说不定有新的发现。
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14楼2011-11-28 12:08:45
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rainontime

新虫 (小有名气)
很多文献上都用Maxam-Gilbert方法，请问有人知道这种方法吗？
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15楼2011-11-28 15:03:13
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-11-28 18:01:51
引用回帖:
15楼: Originally posted by rainontime at 2011-11-28 15:03:13:
很多文献上都用Maxam-Gilbert方法，请问有人知道这种方法吗？

你说的这种方法是普片用于DNA 片段序列的测定。其原理为：将一个 DNA 片段的 5' 端磷酸基作放射性标记，再分别采用不同的化学方法修饰和裂解特定碱基，从而产生一系列长度不一而 5' 端被标记的 DNA 片段，这些以特定碱基结尾的片段群通过凝胶电泳分离，再经放射线自显影，确定各片段末端碱基，从而得出目的 DNA 的碱基序列。
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
16楼2011-11-28 16:44:34
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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17楼2011-11-29 16:35:22
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大肠菌

新虫 (初入文坛)
您好，我想问您下，您当时是用什么方法确定酶切位点的碱基的？？？？？我现在也想去测定一种限制性内切酶的酶切位点的碱基。wyyngd0422@163.com
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相识是一种缘分！！珍惜每个相识的人！！
18楼2016-01-22 15:04:57
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大肠菌

新虫 (初入文坛)
跪求，为止内切酶位点碱基的确定方法
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相识是一种缘分！！珍惜每个相识的人！！
19楼2016-01-22 16:20:47
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