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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): good!鼓励交流! 2011-11-27 11:18:00
引用回帖:
8楼: Originally posted by 0624410024 at 2011-11-25 10:59:18:
如果你确定你这种酶为限制性内切酶,而你只是想知道它的酶切位点的碱基的话,我觉得你是不是可以酶切之前的测序,然后酶切后的片段测序,然后比较下应该能知道在那里进行酶切的吧?个人观点哈~~

那我想问问你这种酶是咋过弄出来的!你弄到这种酶肯定知道有关它的信息吧?~我个人感觉还有一种方法就是吧大多数酶的酶切位点进行下分析,然后把酶切的序列连在一起,人工合成一段DNA序列,这样你的引物就好设计了!然后再用你的酶去切!只有四种碱基,要合成的DNA也应该不是很长,4的4次方吧?纯属个人观点哈!~~海涵哈~~~
每天坚持多一点,以后困难少一点!
11楼2011-11-25 16:45:36
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-11-27 11:17:45
多整点底物来切,片段够了就可以测序啦,我瞎说的,不知道可行否
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
12楼2011-11-25 20:59:09
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励新虫多发贴!鼓励多来分子生物版! 2011-11-27 16:14:54
额,酶也不是很贵,不行买个得了,干嘛废那事情
13楼2011-11-27 11:41:05
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chenchuan24891

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

理论上7楼说的是可以的,但是正如9楼所说的一样,楼主对你的酶都完全不了解,所以反应体系也确定不了,那你也不好找合适的片段来进行酶切,如果楼主有兴趣的话是可以试一下,反正也不知道是什么酶,说不定有新的发现。
14楼2011-11-28 12:08:45
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rainontime

新虫 (小有名气)

很多文献上都用Maxam-Gilbert方法,请问有人知道这种方法吗?
15楼2011-11-28 15:03:13
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-11-28 18:01:51
引用回帖:
15楼: Originally posted by rainontime at 2011-11-28 15:03:13:
很多文献上都用Maxam-Gilbert方法,请问有人知道这种方法吗?

你说的这种方法是普片用于DNA 片段序列的测定。其原理为:将一个 DNA 片段的 5' 端磷酸基作放射性标记,再分别采用不同的化学方法修饰和裂解特定碱基,从而产生一系列长度不一而 5' 端被标记的 DNA 片段,这些以特定碱基结尾的片段群通过凝胶电泳分离,再经放射线自显影,确定各片段末端碱基,从而得出目的 DNA 的碱基序列。


每天坚持多一点,以后困难少一点!
16楼2011-11-28 16:44:34
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
17楼2011-11-29 16:35:22
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大肠菌

新虫 (初入文坛)

您好,我想问您下,您当时是用什么方法确定酶切位点的碱基的?????我现在也想去测定一种限制性内切酶的酶切位点的碱基。wyyngd0422@163.com
相识是一种缘分!!珍惜每个相识的人!!
18楼2016-01-22 15:04:57
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大肠菌

新虫 (初入文坛)

跪求,为止内切酶位点碱基的确定方法
相识是一种缘分!!珍惜每个相识的人!!
19楼2016-01-22 16:20:47
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