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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何? 已有5人参与

如题,请问NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何?怎么做才能尽量减少双切不彻底的情况出现?

每当双切片段和载体连接时,总是出现假阳性。郁闷啊!

恳请高手帮忙啊
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jqq1985

银虫 (正式写手)


看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-03 13:24:26
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:34:49
NdeI不是很稳定。酶切效果很难说。XhoI ,BglII比较好用。双酶切效率与很多因素有关,两个酶切位点的距离太近也会影响酶切效率。
2楼2010-08-03 12:49:01
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:35:12
我用过这两组酶,NEB和Fermentas都还是不错的
3楼2010-08-03 13:36:55
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wh7690703

木虫 (正式写手)

我使用的是Takara的酶,两组酶酶切总是不彻底,根本就筛选不到阳性克隆子
4楼2010-08-04 09:36:32
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

wh7690703(金币+1): 2010-08-04 21:17:48
Nde I 很难切 不知道这个酶为什么这么娇气
5楼2010-08-04 15:39:35
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noheartman

金虫 (小有名气)

wh7690703(金币+1): 2010-08-04 21:17:55
我用的是pET28a的载体,这两个酶切都没有问题。
6楼2010-08-04 15:46:50
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wh7690703

木虫 (正式写手)

请高手帮忙
7楼2010-08-17 10:12:35
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jasco

木虫 (正式写手)

wh7690703(金币+1): 2010-08-17 10:37:12
ndeI 相对难切点,外源片段pcr的时候多加几个保护碱基,载体先用nde I单切开再用xho I切
8楼2010-08-17 10:19:11
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wh7690703

木虫 (正式写手)

NdeI先单切再用XhoI切我也用过,但就是不行啊
NdeI/XhoI和BglII/XhoI双切的都是T-目的片段和表达载体,然后连接的话就是连不上
9楼2010-08-17 10:36:11
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jasco

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wh7690703 at 2010-08-17 10:36:11:
NdeI先单切再用XhoI切我也用过,但就是不行啊
NdeI/XhoI和BglII/XhoI双切的都是T-目的片段和表达载体,然后连接的话就是连不上

还有一个想法,因为你这两组双酶切都涉及xho I,考虑是不是xho I酶有问题了?
10楼2010-08-17 11:04:30
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