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wh7690703

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？已有5人参与

如题，请问NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？怎么做才能尽量减少双切不彻底的情况出现？

每当双切片段和载体连接时，总是出现假阳性。郁闷啊！

恳请高手帮忙啊

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1楼 2010-08-03 11:05:35

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jasco

木虫 (正式写手)

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wh7690703(金币+1): 2010-08-17 10:37:12

ndeI 相对难切点，外源片段pcr的时候多加几个保护碱基，载体先用nde I单切开再用xho I切

8楼2010-08-17 10:19:11

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jqq1985

银虫 (正式写手)

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看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-03 13:24:26
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:34:49

NdeI不是很稳定。酶切效果很难说。XhoI ，BglII比较好用。双酶切效率与很多因素有关，两个酶切位点的距离太近也会影响酶切效率。

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2楼2010-08-03 12:49:01

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lwiaanngg

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wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:35:12

我用过这两组酶，NEB和Fermentas都还是不错的

3楼2010-08-03 13:36:55

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wh7690703

木虫 (正式写手)

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我使用的是Takara的酶，两组酶酶切总是不彻底，根本就筛选不到阳性克隆子

4楼2010-08-04 09:36:32

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