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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？
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wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？ 已有5人参与

如题，请问NdeI/XhoI和BglII/XhoI这两对内切酶效率如何？怎么做才能尽量减少双切不彻底的情况出现？

每当双切片段和载体连接时，总是出现假阳性。郁闷啊！

恳请高手帮忙啊
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1楼 2010-08-03 11:05:35
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★
看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-03 13:24:26
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:34:49
NdeI不是很稳定。酶切效果很难说。XhoI ，BglII比较好用。双酶切效率与很多因素有关，两个酶切位点的距离太近也会影响酶切效率。
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2楼2010-08-03 12:49:01
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 09:35:12
我用过这两组酶，NEB和Fermentas都还是不错的
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3楼2010-08-03 13:36:55
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wh7690703

木虫 (正式写手)
我使用的是Takara的酶，两组酶酶切总是不彻底，根本就筛选不到阳性克隆子
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4楼2010-08-04 09:36:32
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 21:17:48
Nde I 很难切 不知道这个酶为什么这么娇气
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5楼2010-08-04 15:39:35
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noheartman

金虫 (小有名气)
wh7690703(金币+1): 2010-08-04 21:17:55
我用的是pET28a的载体，这两个酶切都没有问题。
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6楼2010-08-04 15:46:50
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wh7690703

木虫 (正式写手)
请高手帮忙
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7楼2010-08-17 10:12:35
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jasco

木虫 (正式写手)
wh7690703(金币+1): 2010-08-17 10:37:12
ndeI 相对难切点，外源片段pcr的时候多加几个保护碱基，载体先用nde I单切开再用xho I切
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8楼2010-08-17 10:19:11
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wh7690703

木虫 (正式写手)
NdeI先单切再用XhoI切我也用过，但就是不行啊
NdeI/XhoI和BglII/XhoI双切的都是T-目的片段和表达载体，然后连接的话就是连不上
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9楼2010-08-17 10:36:11
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jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wh7690703 at 2010-08-17 10:36:11:
NdeI先单切再用XhoI切我也用过，但就是不行啊
NdeI/XhoI和BglII/XhoI双切的都是T-目的片段和表达载体，然后连接的话就是连不上

还有一个想法，因为你这两组双酶切都涉及xho I，考虑是不是xho I酶有问题了？
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10楼2010-08-17 11:04:30
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