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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】内切酶Bbvc1的问题
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韩丽丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】内切酶Bbvc1的问题 已有3人参与

用Bbvc1和Asc1 双切载体和片段，载体8K片段5K结果总是连不上，已经重复了很多遍，是粘端连为什么总也连不上，是不是Bbvc1切后很难在连上啊？有用过这个酶的朋友可以分享一下你们的经验吗？
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1楼 2010-05-13 15:56:11
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
plantaqp(金币+3):欢迎交流 2010-05-16 02:30:30
我用过Bbvc1这酶，这酶耽误了我好长时间。。。
你怎么会用到这种稀有酶呢，最好是避开啊。
应该用的也是NEB的吧，识别7碱基，酶切效率挺低的，切开后连接效率也很低。
估计你连不上很可能是载体上的酶切位点没有切开，是不是转化子都是空载体啊?
当时我是利用了载体上另外一个酶切位点，和Bbvc1以及另外一种酶做的三酶切，保证Bbvc1酶切位点是完全切开，然后做三片段连接的，一次就成功了。。。
可能说的不太清楚，你如果还有什么疑问，随时解答。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-15 16:14:34
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韩丽丽

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 韩丽丽 at 2010-05-13 15:56:11:
用Bbvc1和Asc1 双切载体和片段，载体8K片段5K结果总是连不上，已经重复了很多遍，是粘端连为什么总也连不上，是不是Bbvc1切后很难在连上啊？有用过这个酶的朋友可以分享一下你们的经验吗？

恩，情况和你分析的一样，那我再做时也用下你的经验，谢谢了，希望能成功！
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3楼2010-05-15 22:47:05
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小白兄

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知道是转化不长还是长的都是没连上的？
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时光如流水，匆匆而过。
4楼2010-05-16 01:24:50
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小白兄

金虫 (小有名气)
如果是长的都不是阳性，可以尝试加CIAP增加连接特异性
赞一下 回复此楼
时光如流水，匆匆而过。
5楼2010-05-16 12:39:19
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