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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)


[交流] 合成一段DNA的问题?引物,PCR

想合成一段双链的DNA,大概50个BP,好像公司合的话价格稍高。
想设计成两段引物,想问下如果是两段互补DNA双链的话可以利用一定条件直接使其结合成双链吗?或是设计成两段有重叠的引物,互为模板,是否可行呢?条件大概怎么控制?
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loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2012-02-11 19:57:01
loveskyzhou(金币+1): 2012-02-13 17:46:40
可以合成两段寡核苷酸单链(加上酶切位点),加上退火缓冲液后从94度降温到退火温度,连到载体上转化大肠杆菌,测序验证,可以引入新的酶切位点等。
5楼2012-02-11 13:33:32
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)



loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
重叠延伸应该可行吧

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2楼2012-02-11 12:13:55
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wanhscn

木虫 (职业作家)



loveskyzhou(金币+1):谢谢参与
运气好的话,理论上可行!
运气不好,还是得不到你想要的。
3楼2012-02-11 13:08:15
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)


送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by joan198108 at 2012-02-11 12:13:55:
重叠延伸应该可行吧

重叠延伸就是两段引物重叠相互P吧,可是这样做的话很难找到合适的Tm值啊,如果重叠过长Tm太高怎么P ? 段的话又怕P不出来。。。。。
4楼2012-02-11 13:29:57
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