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zjt829

木虫 (正式写手)

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性别: GG
专业: 环境污染化学

[求助] 电泳胶片原因分析，如图所示

SDS-page电泳跑出的结果如下，请大家帮忙分析一下原因吧，谢了~
蛋白：植物组织蛋白提取液（用tris-HCl的方法提的，然后直接与上样缓冲液混合之后上样）
最左边marker：170KD-10KD
请分析

12%分离胶+6%浓缩胶

[ Last edited by zjt829 on 2012-8-23 at 18:11 ]

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淡泊志宁静远

1楼2012-08-23 18:04:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yyk81

木虫 (正式写手)

应助: 14 (小学生)
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注册: 2011-09-02
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+5, ★有帮助, 这个胶片上的蛋白量看起来应该不算少吧？ 2012-08-24 10:56:33

SDSPAGE中样品跑不出加样孔最主要的原因是样本太浓而且含有不溶性物质，解决方案:1、适当稀释样品; 2、加入上样缓冲液后煮沸时间要保证，且一定要充分离心，只取上清上样。我一般是煮沸5-10分钟，13000rpm离心3-5分钟。
当然还有其他原因，比如:样品pH值不合适、上样缓冲液中SDS析出。但这些问题很容易肉眼看到，不易发生。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]