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zjt829

木虫 (正式写手)

[求助] 电泳胶片原因分析,如图所示

SDS-page电泳跑出的结果如下,请大家帮忙分析一下原因吧,谢了~
蛋白:植物组织蛋白提取液(用tris-HCl的方法提的,然后直接与上样缓冲液混合之后上样)
最左边marker:170KD-10KD
请分析

12%分离胶+6%浓缩胶

[ Last edited by zjt829 on 2012-8-23 at 18:11 ]
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淡泊志宁静远
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zjt829

木虫 (正式写手)

为什么没人来回答呢
淡泊志宁静远
2楼2012-08-23 20:37:10
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zjt829: 金币+2 2012-08-24 10:54:22
似乎提取效果不佳啊,都拖尾了。此外,楼主你的胶哪是上哪是下啊?
3楼2012-08-23 22:58:38
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zjt829: 金币+2, 说错了,右边的是marker,呵呵,样品没提好??? 2012-08-24 10:55:01
同意楼上的,看上去最右边的是marker,分离得很清晰,而不像楼主说的左边是marker。
4楼2012-08-24 00:35:28
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yyk81

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zjt829: 金币+5, 有帮助, 这个胶片上的蛋白量看起来应该不算少吧? 2012-08-24 10:56:33
SDSPAGE中样品跑不出加样孔最主要的原因是样本太浓而且含有不溶性物质,解决方案:1、适当稀释样品; 2、加入上样缓冲液后煮沸时间要保证,且一定要充分离心,只取上清上样。我一般是煮沸5-10分钟,13000rpm离心3-5分钟。
当然还有其他原因,比如:样品pH值不合适、上样缓冲液中SDS析出。但这些问题很容易肉眼看到,不易发生。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学无止境!
5楼2012-08-24 07:38:44
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zjt829

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-23 22:58:38
似乎提取效果不佳啊,都拖尾了。此外,楼主你的胶哪是上哪是下啊?

上面的顺序就是正常的上下顺序啊
淡泊志宁静远
6楼2012-08-24 10:53:56
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zjt829

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-23 22:58:38
似乎提取效果不佳啊,都拖尾了。此外,楼主你的胶哪是上哪是下啊?

这就是上下顺序
淡泊志宁静远
7楼2012-08-24 10:54:15
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zjt829

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-23 22:58:38
似乎提取效果不佳啊,都拖尾了。此外,楼主你的胶哪是上哪是下啊?

您是说蛋白没提取出来么?但是最上面那一堆蓝色不是蛋白的么?
淡泊志宁静远
8楼2012-08-24 11:07:35
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
zjt829: 金币+2, 多谢 2012-08-25 20:26:31
引用回帖:
8楼: Originally posted by zjt829 at 2012-08-24 11:07:35
您是说蛋白没提取出来么?但是最上面那一堆蓝色不是蛋白的么?...

提是提出来了,但是,蛋白有SMEAR.......
第二块胶似乎又没跑动,楼主先把蛋白稀释一倍,跑长点时间再看。
9楼2012-08-24 14:06:02
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wenzonglu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢参与,能考虑到植物的特殊性 2012-08-25 03:18:00
zjt829: 金币+5, 多谢,处理方法呢,能提示一下么? 2012-08-25 09:45:27
标准条带跑出来很清楚,样品没见好的条带,原因可能是:一、提取过程出现蛋白断裂导致样品带有弥散状。二、植物蛋白大多数不是单独存在,会结合像多糖等成分,不易分开导致分子量很大电泳跑不开。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2012-08-24 22:43:06
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