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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 电泳胶片原因分析，如图所示
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荒原苦行僧

铜虫 (小有名气)
这样的问题我在做发酵实验的时候也遇到过，是枯草杆菌的发酵，发酵完之后用的琼脂糖凝胶电泳，组后出来的图和楼主上面的图有点像，最后记得老师是让用溴酚蓝浸泡过夜染色的，后来图出来了，但是不是特别清晰，不过到现在也不太明白原理是什么……
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11楼2012-08-25 13:05:04
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zjt829

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 荒原苦行僧 at 2012-08-25 13:05:04
这样的问题我在做发酵实验的时候也遇到过，是枯草杆菌的发酵，发酵完之后用的琼脂糖凝胶电泳，组后出来的图和楼主上面的图有点像，最后记得老师是让用溴酚蓝浸泡过夜染色的，后来图出来了，但是不是特别清晰，不过到 ...

再试试吧
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淡泊志宁静远
12楼2012-08-25 20:27:11
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wenzonglu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+2, 新主意 2012-08-26 04:41:02
zjt829: 金币+3, 好的，多谢，糖酚之类都是如何去除，在不影响金属蛋白的情况 2012-08-26 10:43:20
先确定你目的蛋白的大致分子量，查其资料看看是否会跟多糖、多酚之类的物质结合，如果有结合实际分子量将大于理论值。然后不加标准条带先跑一次（参数不变，延长时间一个小时）看看是否能大致分开？就算看不出条带也没关系，只要能拉开蛋白。如果能拉开部分蛋白的话，根据你目的蛋白实际的分子量，使用透析袋处理（不贵，很多规格可以选的）。这个过程需要浓缩的话，使用真空冷冻干燥机，可以保证蛋白活性。
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13楼2012-08-25 23:15:14
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+2, 胶没问题，电压120 2012-08-26 10:43:43
应该是右边是marker吧   胶就没有配好   电压可能不够
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快乐奋斗，创造所有。
14楼2012-08-25 23:26:41
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wenzonglu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
zjt829: 金币+2 2012-08-26 16:45:50
不知道楼主对该蛋白的研究深度如何。如果是实验中的一个核心指标，要研究其结构、功能等，就需要做蛋白质纯化，可以参考冷泉港实验室开设的一门《蛋白质纯化与鉴定》实验课的教材之《蛋白质纯化与鉴定实验指南》（翻译中文过来的，可以百度一下）。
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15楼2012-08-26 15:00:12
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zjt829

木虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by wenzonglu at 2012-08-26 15:00:12
不知道楼主对该蛋白的研究深度如何。如果是实验中的一个核心指标，要研究其结构、功能等，就需要做蛋白质纯化，可以参考冷泉港实验室开设的一门《蛋白质纯化与鉴定》实验课的教材之《蛋白质纯化与鉴定实验指南》（翻 ...

总蛋白分离鉴定
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淡泊志宁静远
16楼2012-08-26 16:46:14
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

【答案】应助回帖

我是专业做蛋白电泳的，在你的叙述里似乎做得没有问题，但是你的上样Buffer配的对了吗？这种图Marker正常，证明胶配的没问题，问题出在样品，样品都是蛋白，就算有多糖、DNA也不影响整体效果；
1、蛋白要提取出来：Tris提取液要加NaCl增加溶解性，加巯基乙醇保护蛋白，pH要合适，在中性，植物样品一定要加PVP去除酚类！！！研磨保持低温防止降解
2、Samplebuffer也就是蓝色的上样缓冲一定不能忘了加SDS！！！参看Takara配方你再仔细看看

强烈怀疑你没加SDS在样品缓冲，或者没有煮样；PVP也会是一个问题，谢谢
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坚强面对生活
17楼2012-09-06 10:13:10
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