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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 电泳胶片原因分析，如图所示
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zjt829

木虫 (正式写手)

[求助] 电泳胶片原因分析，如图所示

SDS-page电泳跑出的结果如下，请大家帮忙分析一下原因吧，谢了~
蛋白：植物组织蛋白提取液（用tris-HCl的方法提的，然后直接与上样缓冲液混合之后上样）
最左边marker：170KD-10KD
请分析

12%分离胶+6%浓缩胶

[ Last edited by zjt829 on 2012-8-23 at 18:11 ]
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淡泊志宁静远
1楼 2012-08-23 18:04:05
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

【答案】应助回帖

我是专业做蛋白电泳的，在你的叙述里似乎做得没有问题，但是你的上样Buffer配的对了吗？这种图Marker正常，证明胶配的没问题，问题出在样品，样品都是蛋白，就算有多糖、DNA也不影响整体效果；
1、蛋白要提取出来：Tris提取液要加NaCl增加溶解性，加巯基乙醇保护蛋白，pH要合适，在中性，植物样品一定要加PVP去除酚类！！！研磨保持低温防止降解
2、Samplebuffer也就是蓝色的上样缓冲一定不能忘了加SDS！！！参看Takara配方你再仔细看看

强烈怀疑你没加SDS在样品缓冲，或者没有煮样；PVP也会是一个问题，谢谢
赞一下(2人) 回复此楼
坚强面对生活
17楼2012-09-06 10:13:10
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查看全部 17 个回答

zjt829

木虫 (正式写手)
为什么没人来回答呢
赞一下 回复此楼
淡泊志宁静远
2楼2012-08-23 20:37:10
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+2 2012-08-24 10:54:22
似乎提取效果不佳啊，都拖尾了。此外，楼主你的胶哪是上哪是下啊？
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-23 22:58:38
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zjt829: 金币+2, 说错了，右边的是marker，呵呵，样品没提好？？？ 2012-08-24 10:55:01
同意楼上的，看上去最右边的是marker，分离得很清晰，而不像楼主说的左边是marker。
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-24 00:35:28
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查看全部 17 个回答
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