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zjt829

木虫 (正式写手)

[求助] 电泳胶片原因分析,如图所示

SDS-page电泳跑出的结果如下,请大家帮忙分析一下原因吧,谢了~
蛋白:植物组织蛋白提取液(用tris-HCl的方法提的,然后直接与上样缓冲液混合之后上样)
最左边marker:170KD-10KD
请分析

12%分离胶+6%浓缩胶

[ Last edited by zjt829 on 2012-8-23 at 18:11 ]
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淡泊志宁静远
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

【答案】应助回帖

我是专业做蛋白电泳的,在你的叙述里似乎做得没有问题,但是你的上样Buffer配的对了吗?这种图Marker正常,证明胶配的没问题,问题出在样品,样品都是蛋白,就算有多糖、DNA也不影响整体效果;
1、蛋白要提取出来:Tris提取液要加NaCl增加溶解性,加巯基乙醇保护蛋白,pH要合适,在中性,植物样品一定要加PVP去除酚类!!!研磨保持低温防止降解
2、Samplebuffer也就是蓝色的上样缓冲一定不能忘了加SDS!!!参看Takara配方你再仔细看看

强烈怀疑你没加SDS在样品缓冲,或者没有煮样;PVP也会是一个问题,谢谢
坚强面对生活
17楼2012-09-06 10:13:10
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查看全部 17 个回答

zjt829

木虫 (正式写手)

为什么没人来回答呢
淡泊志宁静远
2楼2012-08-23 20:37:10
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zjt829: 金币+2 2012-08-24 10:54:22
似乎提取效果不佳啊,都拖尾了。此外,楼主你的胶哪是上哪是下啊?
3楼2012-08-23 22:58:38
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wizardfan

至尊木虫 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zjt829: 金币+2, 说错了,右边的是marker,呵呵,样品没提好??? 2012-08-24 10:55:01
同意楼上的,看上去最右边的是marker,分离得很清晰,而不像楼主说的左边是marker。
4楼2012-08-24 00:35:28
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