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[交流]
关于丙烯酰胺凝胶电泳跑DNA样品的几个问题
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小弟最近做OVERLAP pcr，有几个片段大小为200-300bp，用1%琼脂糖电泳跑胶，发现有不少非特异性带，大小与目的带相差不到100bp，在胶上难以区分，因为还要回收片段，于是想用PAGE胶电泳。 这里几个问题，想请教大家： 1.PAGE胶的浓度和电压，多少为好？ 2.maker用是不是用的还是琼脂糖电泳的MAKER, 是的话 上样量多少？ 3.用PAGE电泳跑DNA，如何做回收？？ 4.如果不用page，采用琼脂糖电泳，提高做胶的浓度到2%，电压还是用原来跑1%的电压和时间吗？如果不是，如何改进？ |
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小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-21 17:28:38
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1.PAGE胶的浓度和电压，多少为好？ 100V左右，普通蛋白电泳槽，不清纯具体尺寸了，但是是用TBE buffer，可以跑两个小时，100bp大概在PAGE中间 2.maker用是不是用的还是琼脂糖电泳的MAKER, 是的话 上样量多少？ maker可以继续使用，最好用100bp ladder 那种 3.用PAGE电泳跑DNA，如何做回收？？ 我以前是切下来，跑横向电泳回收，估计也可以用TE重溶（我自己没做过） 4.如果不用page，采用琼脂糖电泳，提高做胶的浓度到2%，电压还是用原来跑1%的电压和时间吗？如果不是，如何改进？ 这个问题上面已经回答过了 |
9楼2012-11-21 15:23:38
10楼2015-12-22 20:18:34