24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

shuangzi8761

银虫 (著名写手)

应助: 10 (幼儿园)
金币: 6472.4
帖子: 1549
在线: 309.3小时
虫号: 1449451

[交流] 关于丙烯酰胺凝胶电泳跑DNA样品的几个问题

小弟最近做OVERLAP pcr，有几个片段大小为200-300bp，用1%琼脂糖电泳跑胶，发现有不少非特异性带，大小与目的带相差不到100bp，在胶上难以区分，因为还要回收片段，于是想用PAGE胶电泳。
这里几个问题，想请教大家：
1.PAGE胶的浓度和电压，多少为好？
2.maker用是不是用的还是琼脂糖电泳的MAKER, 是的话上样量多少？
3.用PAGE电泳跑DNA，如何做回收？？
4.如果不用page，采用琼脂糖电泳，提高做胶的浓度到2%，电压还是用原来跑1%的电压和时间吗？如果不是，如何改进？

回复此楼

» 猜你喜欢

NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析已经有0人回复
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有156人回复
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点已经有0人回复
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂已经有0人回复
氢氧化钾活化操作已经有18人回复
散金已经有68人回复
生物质超级电容器已经有0人回复
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析已经有0人回复
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

【求助】蛋白质非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳已经有16人回复
请教为什么我的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后条带有些弥散！已经有9人回复
关于变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的问题已经有5人回复
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳电压方面的问题已经有20人回复
4%PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）250bp处条带出现扭曲，求助！已经有19人回复
CRP的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳已经有6人回复
AFLP，聚丙烯酰胺胶电泳，总是出问题已经有10人回复
银染色聚丙烯酰胺凝胶电泳已经有13人回复
DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染如何让背景颜色不那么深已经有23人回复
有关聚丙烯酰胺凝胶电泳的几个问题已经有11人回复
聚丙烯酰胺凝胶电泳问题的讨论已经有17人回复
聚丙烯酰胺凝胶电泳-marker和样品中溴酚蓝-都在点样孔中不动已经有12人回复
MSAP聚丙烯酰胺凝胶电泳的耳朵板跑裂了! 已经有11人回复
聚丙烯酰胺凝胶电泳已经有7人回复
做SRAP标记的进来，DNA聚丙烯酰胺电泳，预电泳问题。。。已经有22人回复
如何在丙烯酰胺凝胶中固定天然DNA 已经有8人回复
DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳神马都跑不出来已经有9人回复
聚丙烯酰胺凝胶电泳灌胶后能放多久已经有17人回复
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，染色问题已经有8人回复
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳制板的问题已经有24人回复
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳求助已经有14人回复
【求助/交流】变性聚丙烯酰胺SRAP凝胶电泳已经有8人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2012-11-20 21:27:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极交流经验 2012-11-21 17:28:38

1.PAGE胶的浓度和电压，多少为好？
100V左右，普通蛋白电泳槽，不清纯具体尺寸了，但是是用TBE buffer，可以跑两个小时，100bp大概在PAGE中间
2.maker用是不是用的还是琼脂糖电泳的MAKER, 是的话上样量多少？
maker可以继续使用，最好用100bp ladder 那种
3.用PAGE电泳跑DNA，如何做回收？？
我以前是切下来，跑横向电泳回收，估计也可以用TE重溶（我自己没做过）
4.如果不用page，采用琼脂糖电泳，提高做胶的浓度到2%，电压还是用原来跑1%的电压和时间吗？如果不是，如何改进？
这个问题上面已经回答过了

赞一下(1人)