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芕星悦

新虫 (小有名气)

[交流] 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳电压方面的问题

6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，不知道有没有其他人用过400V电压的，我们实验室跑SRAP和SSR基本都是先200V预电泳20min，然后转到400V电泳，感觉效果还可以，不知道其他人做得如何，进行一下交流。
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1楼 2012-08-10 09:49:15
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回帖置顶 ( 共有14个 )

dshlove

木虫 (正式写手)
★
芕星悦(金币+1): 谢谢参与
400V不会跑得太快了点么？我们一般就是200V跑到底啊。效果也是很好的
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2楼2012-08-10 11:26:41
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wangning__

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
芕星悦(金币+1): 谢谢参与
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-08-12 13:35:37
我们跑的是DNA，最多也就是160V，400V太高了吧，不过也和你的样品有关呢。效果不错就好啊。有时摸不着条件特别郁闷！
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3楼2012-08-10 11:39:43
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chenguestc

木虫 (职业作家)
★
芕星悦(金币+1): 谢谢参与
变性胶电压稍微高一些好一些，400V应该有循环水给胶板降温把，不然跑出来的带不弯吗？我们一般用250V。
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4楼2012-08-10 22:17:55
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梅闲寒笑

金虫 (正式写手)
★
芕星悦(金币+1): 谢谢参与
400V 大了吧，，电压与做的胶浓度，以及蛋白大小有很大关系，，一般浓缩胶时，电压稍低，有助于样品在一条线上，跑出来的条带比较齐，，分离胶电压可以稍微大些，，
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5楼2012-08-11 09:13:04
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-10 22:17:55
变性胶电压稍微高一些好一些，400V应该有循环水给胶板降温把，不然跑出来的带不弯吗？我们一般用250V。

没有循环水降温，400V跑100min到150min，跑完后的缓冲液是温的，但条带一般没有弯，只有个别时候弯了。你们一般跑什么标记呢？？
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6楼2012-08-12 09:59:57
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 梅闲寒笑 at 2012-08-11 09:13:04
400V 大了吧，，电压与做的胶浓度，以及蛋白大小有很大关系，，一般浓缩胶时，电压稍低，有助于样品在一条线上，跑出来的条带比较齐，，分离胶电压可以稍微大些，，

我们是跑DNA的，没有跑过蛋白，我测了一下电泳槽的长度，在20多厘米。电压400V的垂直板电泳条件是以前师兄师姐们开始用的，后来我们一直延续，没发现有多大的问题，只是不知道把电压降低会不会效果更好？
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7楼2012-08-12 10:06:08
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangning__ at 2012-08-10 11:39:43
我们跑的是DNA，最多也就是160V，400V太高了吧，不过也和你的样品有关呢。效果不错就好啊。有时摸不着条件特别郁闷！

400V的条件是以前师兄师姐们做出来的，然后我们就延续他们的条件，不清楚电压低了会不会更好？有时候真的对摸索条件感觉很恐怖
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8楼2012-08-12 10:07:35
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-10 11:26:41
400V不会跑得太快了点么？我们一般就是200V跑到底啊。效果也是很好的

哦，试一下吧，我准备，但不喜欢摸索那些条件。曾经师兄师姐他们已经把实验条件摸索得很好了，自己再来摸索，结果越来越差，最终还是用他们的方法。感觉他们都试验过很多次了，条件基本可以达到最优了
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9楼2012-08-12 10:10:05
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137167741

至尊木虫 (著名写手)
★
芕星悦(金币+1): 谢谢参与
250V 10分钟，120 继续
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10楼2012-08-12 11:24:09
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wangning__

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 芕星悦 at 2012-08-12 10:07:35
400V的条件是以前师兄师姐们做出来的，然后我们就延续他们的条件，不清楚电压低了会不会更好？有时候真的对摸索条件感觉很恐怖...

没事可以摸索一下啊，说不定回头还可以出篇论文，既加强了你的专业功底，也有了实质性的收获。怕什么，实验就是要这样。
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11楼2012-08-12 13:00:57
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★
芕星悦(金币+1): 谢谢参与
电压不是问题，最高用过600V，没关系的，关键看你的电流多大，只要不炒机器的承受范围就行，缓冲液可以用0.5X的
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12楼2012-08-13 07:50:17
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by silicare at 2012-08-13 07:50:17
电压不是问题，最高用过600V，没关系的，关键看你的电流多大，只要不炒机器的承受范围就行，缓冲液可以用0.5X的

是不是缓冲液浓度低，电流就低啊？电流低了之后，缓冲液的温度就不会那么快升上去？
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13楼2012-08-13 13:04:21
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 芕星悦 at 2012-08-13 13:04:21
是不是缓冲液浓度低，电流就低啊？电流低了之后，缓冲液的温度就不会那么快升上去？...

嗯，是的，不过预电泳还是要的，如果你的是添加了尿素的，注意吹一下胶孔的尿素，否则跑的胶不匀
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14楼2012-08-13 17:02:33
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芕星悦

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by silicare at 2012-08-13 17:02:33
嗯，是的，不过预电泳还是要的，如果你的是添加了尿素的，注意吹一下胶孔的尿素，否则跑的胶不匀...

电泳缓冲液用0.5xTBE，那配制凝胶母液的时候也是用0.5xTBE，是不？
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15楼2012-08-13 22:01:26
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普通回帖

liwenlevi

金虫 (初入文坛)
★
芕星悦(金币+1): 谢谢参与
这个。。。跑SSR用过1500V的飘过，最近板子总是没有带啊，郁闷啊，求助啊
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16楼2013-04-10 15:51:04
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她小她

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做这个电泳的时候 总是出现点样孔 点一个样，然后外溢，旁边点样孔就也被污染了。请指教一下，这是什么原因。
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17楼2014-07-15 15:02:46
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13561217309

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们浓缩胶是120v，分离胶是200v
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18楼2014-11-19 17:42:54
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lynn金

禁虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
19楼2020-03-05 10:11:03
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lynn金

禁虫
本帖内容被屏蔽
20楼2020-03-05 10:28:38
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lynn金

禁虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
21楼2020-03-05 10:33:58
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