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wujiangjie

木虫 (正式写手)


[交流] 如何在丙烯酰胺凝胶中固定天然DNA

各位大虾,我现在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然鱼精DNA物理吸附后,DNA泄露比较严重,我考虑利用AM上的氨基共价修饰DNA,但是那些方法都建立在修饰合成DNA基础上,比如修饰5'端,修饰DNA上的磷酸基团,可是我的是天然DNA,它是混合的,这些方法都不好修饰,请问有没有什么方法可以解决这个问题,让DNA不在泄露呢?谢谢!!!
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beastzq

木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢! 2011-07-13 20:39:55
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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-12 19:41:01:
各位大虾,我现在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然鱼精DNA物理吸附后,DNA泄露比较严重,我考虑利用AM上的氨基共价修饰DNA,但是那些方法都建立在修饰合成DNA基础上,比如修饰5'端,修饰DNA上的磷酸基团,可是我的是 ...

一定要吸附吗?合成PAM的时候就把DNA包埋进去好了
或者合成凝胶的时候加点阳离子单体共聚,可能可以增加吸附量
或者与反应性强的单体(如烯丙基缩水甘油醚等)共聚,再共价固定DNA
AM上的氨基是酰胺,一般情况下很稳定,反应性不好的
3楼2011-07-13 19:46:51
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wujiangjie

木虫 (正式写手)


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Originally posted by beastzq at 2011-07-13 19:46:51:
一定要吸附吗?合成PAM的时候就把DNA包埋进去好了
或者合成凝胶的时候加点阳离子单体共聚,可能可以增加吸附量
或者与反应性强的单体(如烯丙基缩水甘油醚等)共聚,再共价固定DNA
AM上的氨基是酰胺,一般情 ...

谢谢你的回复!我就是合成PAM包埋的,但是不行,过段时间后泄露了。我的DNA是天然混合的,不好修饰,所以共价不行。另外关于合成凝胶时加点阳离子单体共聚,请问你能具体给几个例子吗,常见的,便宜的?还有这个会影响凝胶成胶吗?会不会不能成胶呢?谢谢!!!
4楼2011-07-13 20:43:03
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beastzq

木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢! 2011-07-14 09:08:07
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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-13 20:43:03:
谢谢你的回复!我就是合成PAM包埋的,但是不行,过段时间后泄露了。我的DNA是天然混合的,不好修饰,所以共价不行。另外关于合成凝胶时加点阳离子单体共聚,请问你能具体给几个例子吗,常见的,便宜的? ...

你DNA的分子量是多大的?一般几千到几万的聚合物都很容易固定的啊
如果包埋不了,交联剂多加点也可以。
你的凝胶是多孔的?用什么方法做的多孔凝胶呢?
阳离子单体可以是二甲基二烯丙基氯化铵等季铵盐单体,和AM共聚没问题的,
如果是带胍基的,应该吸附效果会很好,但是单体要自己合成,我也没试过,不过文献很多的。
5楼2011-07-13 21:36:41
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wujiangjie

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Originally posted by beastzq at 2011-07-13 21:36:41:
你DNA的分子量是多大的?一般几千到几万的聚合物都很容易固定的啊
如果包埋不了,交联剂多加点也可以。
你的凝胶是多孔的?用什么方法做的多孔凝胶呢?
阳离子单体可以是二甲基二烯丙基氯化铵等季铵盐单体, ...

谢谢你的回复!我那个DNA是几十个碱基到几百个碱基的都有,我那个胶是25%的,应该比较密了吧,凝胶应该是多孔的吧,要不也不能用这个凝胶跑电泳什么的吧?我觉得应该是有孔道的,并且可以把DNA吸在里面的,但是这个吸附也就是正电荷和负的磷酸骨架静电作用不强的话,那么DNA就漏了。另外请问这个阳离子单体都是文献里报道过的吗?因为这个都好贵啊,我想先买便宜的试试共聚后效果如何,请问有什么阳离子单体既便宜,又可以达到增大正电荷密度的效果,文献里有报道吗?谢谢!!!
6楼2011-07-14 09:13:11
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beastzq

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢! 2011-07-14 14:43:12
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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-14 09:13:11:
谢谢你的回复!我那个DNA是几十个碱基到几百个碱基的都有,我那个胶是25%的,应该比较密了吧,凝胶应该是多孔的吧,要不也不能用这个凝胶跑电泳什么的吧?我觉得应该是有孔道的,并且可以把DNA吸在里面的,但是 ...

不加电场的时候应该不太会漏的吧?
买进口试剂都贵的,这个已经是最普通的了
一些阳离子单体国内有的皮包公司也卖,可以要点小样
7楼2011-07-14 13:57:53
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wujiangjie

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Originally posted by beastzq at 2011-07-14 13:57:53:
不加电场的时候应该不太会漏的吧?
买进口试剂都贵的,这个已经是最普通的了
一些阳离子单体国内有的皮包公司也卖,可以要点小样

谢谢回复!这个不加电场还是漏,我测试过。请问这个阳离子单体文献有报道吗,你看过相关的文献提到吗,以及在哪买的这些信息吗?谢谢!
8楼2011-07-14 14:44:54
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beastzq

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Originally posted by wujiangjie at 2011-07-14 14:44:54:
谢谢回复!这个不加电场还是漏,我测试过。请问这个阳离子单体文献有报道吗,你看过相关的文献提到吗,以及在哪买的这些信息吗?谢谢!

google之
9楼2011-07-14 15:59:29
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2011-07-12 22:19   回复  
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