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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA丙烯酰胺电泳
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liuchenammk

铜虫 (初入文坛)

[求助] DNA丙烯酰胺电泳

各位师兄师姐！你们好，小弟刚刚研一，求助在DNA丙烯酰胺中比较好的银染方法，小弟感激不尽！网上太乱了，求助师兄师姐们自己操作过程中比较的方法（最好有各种试剂用量）流程！！！
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1楼 2011-09-21 12:12:16
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骄阳微肆

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
liuchenammk(金币+1): 谢谢师兄！ 2011-09-21 22:16:34
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 鼓励 2011-09-22 08:07:54
银染实验
银染溶液的配置：实验之前准备4℃水
1. 固定液（10%醋酸）：20ml冰醋酸，180mlddH2O混匀（通风厨中进行）
2. 染色液：将0.1g AgNO3溶解于100 ml ddH2O中，使用前加0.15ml37%甲醛溶液,必须储存于避光瓶中，防止接触皮肤（通风厨中进行）
3.显影液：将6gNa2CO3溶解于200ml ddH2O中，冷却至4℃， 使用前加0.3ml37%甲醛溶液（通风厨中进行）30μl 0.1M五水硫代硫酸钠；（0.1M Na2S2O3。5H2O：将1.24g Na2S2O3。5H2O溶于50mlddH2O）。放入冰箱中冷却到4摄氏度。
注意事项：
1、        染色液和显影液要现用现配；
2、        显影液必须在4℃使用且必须保存在4℃；
3、        甲醛蒸汽致癌，在通风厨内操作；
4、        实验室中柔和的背景光线有利于降低背景颜色；
5、        显色不能在透光的盒子中进行；
6、        溶液不能直接倒在胶面上，应使盘倾斜后将溶液倒在盘的角上，或者将每种溶液各方一盘，然后将胶从一个盘转到另一个盘；
7、        溶液的体积必须足够将胶全部浸没；
8、        显色过程中盘中须轻轻摇动。

实验步骤：
1、        固定：用刀子轻轻分开玻璃板，将带有凝胶的一块玻璃板放入盛有200ml固定液的盘子中，放在水平摇床上摇动20min或直至染料带完全消失
2、        洗涤：把固定液倒回大烧杯中，然后用ddH2O清洗三次，每次2min
3、        染色：把玻璃板放在盛有100ml染色液的盘子里，在水平摇床上摇动30min
4、        显影：把玻璃板在预冷ddH2O中快速过一下（不超过10s），迅速放入预冷（4℃）的显影液中，显色3-5min或直至所有的带都出现
5、        停止：当出现清晰的条带时，加入先前用过的500ml固定液轻轻摇动，停止显影
6、        用ddH2O将凝胶洗2次，每次2min
7、        晾干，扫描
8、        拍照观察
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努力搞科研
2楼2011-09-21 21:07:13
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-22 12:29:50
如果做的槽子比较多，为方便起见，可省略固定一步。
直接用0.1-0.2%硝酸银染8-15分钟，后清水冲洗3遍，用2%NaOH加1%甲醛的显影液。
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真相是最大的奢侈品
3楼2011-09-22 08:34:53
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kid503

木虫 (正式写手)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励多来分子生物版，多参与交流！ 2011-09-22 10:09:03
DNA 不都在用琼脂糖田永吗
赞一下(1人) 回复此楼
心镜平和阳光暖
4楼2011-09-22 08:49:32
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