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wujiangjie

木虫 (正式写手)

[交流] 如何在聚丙烯酰胺多孔材料中固定天然DNA

各位大虾，我现在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然鱼精DNA物理吸附后，DNA泄露比较严重，我考虑利用AM上的氨基共价修饰DNA，但是那些方法都建立在修饰合成DNA基础上，比如修饰5'端，修饰DNA上的磷酸基团，可是我的是天然DNA，它是混合的，这些方法都不好修饰，请问有没有什么方法可以解决这个问题，让DNA不在泄露呢？谢谢！！！
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1楼 2011-07-12 19:39:04
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peijianjun

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
生物DNA吗 这样高级的东西 算是高科技
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2楼2011-07-12 20:39:45
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erics080

荣誉版主 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢 2011-07-12 22:16:05
在多空材料中间修饰一些带有正电基团,氨基就不错,可以利用静电相互作用来吸附压缩DNA
建议你去看一些关于DNA转染方面的文献
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3楼2011-07-12 21:00:19
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wujiangjie

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by erics080 at 2011-07-12 21:00:19:
在多空材料中间修饰一些带有正电基团,氨基就不错,可以利用静电相互作用来吸附压缩DNA
建议你去看一些关于DNA转染方面的文献

谢谢你的回复！我的那个丙烯酰胺就是带氨基的，在pH=7下，应该是带正电的，但是和DNA混合作用，也就是我一开始提到的单纯的吸附下，是泄露很多DNA的，能麻烦您给我具体说说DNA转染对这个的帮助吗？谢谢了！
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4楼2011-07-12 22:18:28
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erics080

荣誉版主 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢！ 2011-07-13 08:24:19
引用回帖:
Originally posted by wujiangjie at 2011-07-12 22:18:28:
谢谢你的回复！我的那个丙烯酰胺就是带氨基的，在pH=7下，应该是带正电的，但是和DNA混合作用，也就是我一开始提到的单纯的吸附下，是泄露很多DNA的，能麻烦您给我具体说说DNA转染对这个的帮助吗？谢谢了！

DNA传染的材料必须是带有正点基团的, 这样才能将DNA给压缩到材料里面,防止在进入细胞前被降解破坏.好像一般材料都会去做zeta电位,还有凝胶电泳测试,来表征DNA是否被压缩包裹在材料里面
当然你的材料要怎么做,最好还是自己下载了看一下Gene Delivery的文献
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5楼2011-07-12 22:33:31
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Blacksides

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢！ 2011-07-13 07:48:53
你可以用共价键把DNA接到你的高分子上，当然这样有点麻烦。

如果想直接非共价键的话，电荷作用可以考虑。但是你的聚丙烯酰胺带电很弱，基本不太可能吸附DNA。而且如果在PBS里面进行的话，高的离子强度会让这一点微弱作用也被屏蔽掉。

DNA和正电荷的聚电解质比如（poly （aminoethyl acrylate）之间的作用比较强，因为两者分子链上的电荷密度高，协同起来形成的complex稳定性还是不错的，哪怕在PBS里面也会比较稳定。你可以共聚带正电的单体到聚丙烯酰胺上。

还要考虑DNA是单链还是双链的。单链的DNA的链自由度高，更容易静电作用，而双链DNA可以看做一根棒，作用应该弱些。试过才知道。
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6楼2011-07-13 04:43:24
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wujiangjie

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Blacksides at 2011-07-13 04:43:24:
你可以用共价键把DNA接到你的高分子上，当然这样有点麻烦。

如果想直接非共价键的话，电荷作用可以考虑。但是你的聚丙烯酰胺带电很弱，基本不太可能吸附DNA。而且如果在PBS里面进行的话，高的离子强度会让这一 ...

谢谢你的回复！我那个DNA是双链的，天然DNA，用共价挺难的，因为他本身是个混合物，链长是不均一的，这样修饰应该要花大代价，且成功率也不高吧，这是我个人觉得，关于你说的那个用链上带高密度正电荷的单体和丙烯酰胺共聚的话，然后和DNA静电作用，你觉得这个双链DNA的效果好吗？PS：我之前做过PDDA和鱼精DNA的静电作用，效果还行
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7楼2011-07-13 07:52:52
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wujiangjie

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Blacksides at 2011-07-13 04:43:24:
你可以用共价键把DNA接到你的高分子上，当然这样有点麻烦。

如果想直接非共价键的话，电荷作用可以考虑。但是你的聚丙烯酰胺带电很弱，基本不太可能吸附DNA。而且如果在PBS里面进行的话，高的离子强度会让这一 ...

你好！请问你说的是氨乙基甲基丙烯酸酯吗？是下图这个吗？但是这个为什么就是高电荷密度的呢？和丙烯酰胺比较的话，我觉得电荷密度应该差不多吧，每一个单体，C-C双键展开形成聚合物，就会有一个支链带氨基，这样的话，为什么聚氨乙基甲基丙烯酸酯是高电荷密度呢？谢谢！！！
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8楼2011-07-13 09:03:00
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Blacksides

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢！ 2011-07-14 08:51:50
引用回帖:
Originally posted by wujiangjie at 2011-07-13 09:03:00:
你好！请问你说的是氨乙基甲基丙烯酸酯吗？是下图这个吗？但是这个为什么就是高电荷密度的呢？和丙烯酰胺比较的话，我觉得电荷密度应该差不多吧，每一个单体，C-C双键展开形成聚合物，就会有一个支链带氨基，这 ...

对，就是图中那个。一个是质子化了的铵盐，一个只是酰胺，前者正电荷强度要高很多。
如果你是聚合物的多孔想要trap 双链DNA的话，比单链的要难一些，因为没法更好的缠绕。具体怎样试过才知道啊。
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9楼2011-07-13 22:38:11
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wujiangjie

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by Blacksides at 2011-07-13 22:38:11:
对，就是图中那个。一个是质子化了的铵盐，一个只是酰胺，前者正电荷强度要高很多。
如果你是聚合物的多孔想要trap 双链DNA的话，比单链的要难一些，因为没法更好的缠绕。具体怎样试过才知道啊。

谢谢你的回复！请问还有什么可以参与AM的共聚，以提高正电荷密度呢？因为我查了 这个物质好贵，5g就是八百多，并且共聚后效果不一定就提高了，所以我想先买个便宜一点的试试。另外在带电的孔道里trap双链DNA，为什么比单链难呢？这个只需要正电荷孔道和负电的磷酸骨架吸附就行了吧，为什么双链没法更好的缠绕呢？这个我不是很理解，麻烦你帮我详细解答一下，谢谢！！！
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10楼2011-07-14 08:57:19
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Blacksides

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢！ 2011-07-15 09:59:20
引用回帖:
Originally posted by wujiangjie at 2011-07-14 08:57:19:
谢谢你的回复！请问还有什么可以参与AM的共聚，以提高正电荷密度呢？因为我查了 这个物质好贵，5g就是八百多，并且共聚后效果不一定就提高了，所以我想先买个便宜一点的试试。另外在带电的孔道里trap双链DNA， ...

2-(Methacryloyloxy)ethyltrimethylammonium methyl sulfate
是一个便宜的单体。

双链的DNA是比较stiff的，只有长度到了一定程度才会有扭转，短程内是rod，DNA在你的聚合物内很难结合的紧密，而单链的就能够缠绕你的聚合物
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11楼2011-07-15 05:42:23
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