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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wujiangjie

木虫 (正式写手)


[交流] 如何在聚丙烯酰胺多孔材料中固定天然DNA

各位大虾,我现在用聚丙烯酰胺的多孔材料和天然鱼精DNA物理吸附后,DNA泄露比较严重,我考虑利用AM上的氨基共价修饰DNA,但是那些方法都建立在修饰合成DNA基础上,比如修饰5'端,修饰DNA上的磷酸基团,可是我的是天然DNA,它是混合的,这些方法都不好修饰,请问有没有什么方法可以解决这个问题,让DNA不在泄露呢?谢谢!!!
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peijianjun

木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
生物DNA吗 这样高级的东西 算是高科技
2楼2011-07-12 20:39:45
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢 2011-07-12 22:16:05
在多空材料中间修饰一些带有正电基团,氨基就不错,可以利用静电相互作用来吸附压缩DNA
建议你去看一些关于DNA转染方面的文献
3楼2011-07-12 21:00:19
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wujiangjie

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by erics080 at 2011-07-12 21:00:19:
在多空材料中间修饰一些带有正电基团,氨基就不错,可以利用静电相互作用来吸附压缩DNA
建议你去看一些关于DNA转染方面的文献

谢谢你的回复!我的那个丙烯酰胺就是带氨基的,在pH=7下,应该是带正电的,但是和DNA混合作用,也就是我一开始提到的单纯的吸附下,是泄露很多DNA的,能麻烦您给我具体说说DNA转染对这个的帮助吗?谢谢了!
4楼2011-07-12 22:18:28
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢! 2011-07-13 08:24:19
引用回帖:
Originally posted by wujiangjie at 2011-07-12 22:18:28:
谢谢你的回复!我的那个丙烯酰胺就是带氨基的,在pH=7下,应该是带正电的,但是和DNA混合作用,也就是我一开始提到的单纯的吸附下,是泄露很多DNA的,能麻烦您给我具体说说DNA转染对这个的帮助吗?谢谢了!

DNA传染的材料必须是带有正点基团的, 这样才能将DNA给压缩到材料里面,防止在进入细胞前被降解破坏.好像一般材料都会去做zeta电位,还有凝胶电泳测试,来表征DNA是否被压缩包裹在材料里面
当然你的材料要怎么做,最好还是自己下载了看一下Gene Delivery的文献
5楼2011-07-12 22:33:31
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Blacksides

银虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢! 2011-07-13 07:48:53
你可以用共价键把DNA接到你的高分子上,当然这样有点麻烦。

如果想直接非共价键的话,电荷作用可以考虑。但是你的聚丙烯酰胺带电很弱,基本不太可能吸附DNA。而且如果在PBS里面进行的话,高的离子强度会让这一点微弱作用也被屏蔽掉。

DNA和正电荷的聚电解质比如(poly (aminoethyl acrylate)之间的作用比较强,因为两者分子链上的电荷密度高,协同起来形成的complex稳定性还是不错的,哪怕在PBS里面也会比较稳定。你可以共聚带正电的单体到聚丙烯酰胺上。

还要考虑DNA是单链还是双链的。单链的DNA的链自由度高,更容易静电作用,而双链DNA可以看做一根棒,作用应该弱些。试过才知道。
6楼2011-07-13 04:43:24
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wujiangjie

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by Blacksides at 2011-07-13 04:43:24:
你可以用共价键把DNA接到你的高分子上,当然这样有点麻烦。

如果想直接非共价键的话,电荷作用可以考虑。但是你的聚丙烯酰胺带电很弱,基本不太可能吸附DNA。而且如果在PBS里面进行的话,高的离子强度会让这一 ...

谢谢你的回复!我那个DNA是双链的,天然DNA,用共价挺难的,因为他本身是个混合物,链长是不均一的,这样修饰应该要花大代价,且成功率也不高吧,这是我个人觉得,关于你说的那个用链上带高密度正电荷的单体和丙烯酰胺共聚的话,然后和DNA静电作用,你觉得这个双链DNA的效果好吗?PS:我之前做过PDDA和鱼精DNA的静电作用,效果还行
7楼2011-07-13 07:52:52
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wujiangjie

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by Blacksides at 2011-07-13 04:43:24:
你可以用共价键把DNA接到你的高分子上,当然这样有点麻烦。

如果想直接非共价键的话,电荷作用可以考虑。但是你的聚丙烯酰胺带电很弱,基本不太可能吸附DNA。而且如果在PBS里面进行的话,高的离子强度会让这一 ...

你好!请问你说的是氨乙基甲基丙烯酸酯吗?是下图这个吗?但是这个为什么就是高电荷密度的呢?和丙烯酰胺比较的话,我觉得电荷密度应该差不多吧,每一个单体,C-C双键展开形成聚合物,就会有一个支链带氨基,这样的话,为什么聚氨乙基甲基丙烯酸酯是高电荷密度呢?谢谢!!!

8楼2011-07-13 09:03:00
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Blacksides

银虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢! 2011-07-14 08:51:50
引用回帖:
Originally posted by wujiangjie at 2011-07-13 09:03:00:
你好!请问你说的是氨乙基甲基丙烯酸酯吗?是下图这个吗?但是这个为什么就是高电荷密度的呢?和丙烯酰胺比较的话,我觉得电荷密度应该差不多吧,每一个单体,C-C双键展开形成聚合物,就会有一个支链带氨基,这 ...

对,就是图中那个。一个是质子化了的铵盐,一个只是酰胺,前者正电荷强度要高很多。
如果你是聚合物的多孔想要trap 双链DNA的话,比单链的要难一些,因为没法更好的缠绕。具体怎样试过才知道啊。
9楼2011-07-13 22:38:11
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wujiangjie

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by Blacksides at 2011-07-13 22:38:11:
对,就是图中那个。一个是质子化了的铵盐,一个只是酰胺,前者正电荷强度要高很多。
如果你是聚合物的多孔想要trap 双链DNA的话,比单链的要难一些,因为没法更好的缠绕。具体怎样试过才知道啊。

谢谢你的回复!请问还有什么可以参与AM的共聚,以提高正电荷密度呢?因为我查了 这个物质好贵,5g就是八百多,并且共聚后效果不一定就提高了,所以我想先买个便宜一点的试试。另外在带电的孔道里trap双链DNA,为什么比单链难呢?这个只需要正电荷孔道和负电的磷酸骨架吸附就行了吧,为什么双链没法更好的缠绕呢?这个我不是很理解,麻烦你帮我详细解答一下,谢谢!!!
10楼2011-07-14 08:57:19
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Blacksides

银虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wujiangjie(金币+1): 谢谢! 2011-07-15 09:59:20
引用回帖:
Originally posted by wujiangjie at 2011-07-14 08:57:19:
谢谢你的回复!请问还有什么可以参与AM的共聚,以提高正电荷密度呢?因为我查了 这个物质好贵,5g就是八百多,并且共聚后效果不一定就提高了,所以我想先买个便宜一点的试试。另外在带电的孔道里trap双链DNA, ...

2-(Methacryloyloxy)ethyltrimethylammonium methyl sulfate
是一个便宜的单体。

双链的DNA是比较stiff的,只有长度到了一定程度才会有扭转,短程内是rod,DNA在你的聚合物内很难结合的紧密,而单链的就能够缠绕你的聚合物
11楼2011-07-15 05:42:23
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