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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么我的DNA 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 跑成这个鬼样？
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porphybaby

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么我的DNA 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 跑成这个鬼样？

如图所示。

最左边是 一个突变的单链DNA序列 是呈单链结构的 含27个碱基

第二个是 经过退火的一个四链体DNA序列 呈G-四链体结构 也含27个碱基

再往右边走 它们都是加了我的药物处理的DNA 可是会发现 根本就没有条带 跑都跑不出来？？这是怎么回事？ 所用的药物浓度与DNA的比例倍数是1,2，3，4、、、8

在4度下 TBE缓冲液中 80V 电泳 2.5小时 然后银染 的 结果

我想问下 为啥 条带都没有了呢？？？？

DNA电泳图.jpg
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1楼2013-01-21 16:56:14
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回帖置顶 ( 共有1个 )

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-21 20:20:04
amisking: 回帖置顶 2013-01-21 20:20:07
DNA降解？
看你样品顺序，药越多，条带越差，你的药物怎么作用的DNA啊？
好像把条带稀释了的样子，是不是与上样缓冲液有关？
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2楼2013-01-21 17:15:59
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普通回帖

mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉不对啊，很乱啊，是不是药物给污染了。
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3楼2013-01-21 17:47:00
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porphybaby

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cdl007 at 2013-01-21 17:15:59
DNA降解？
看你样品顺序，药越多，条带越差，你的药物怎么作用的DNA啊？
好像把条带稀释了的样子，是不是与上样缓冲液有关？

就是 可能是 插入DNA啊 或者是 跟DNA的沟槽结合咯~~

理论上它会促进 不同构型的 DNA 转换

但 按理来说 应该有条带啊 就是没有 怎么做都没有。。。
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4楼2013-01-21 21:48:17
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porphybaby

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mzhyan at 2013-01-21 17:47:00
感觉不对啊，很乱啊，是不是药物给污染了。

应该不是吧。。。其实我也不知怎么回事 反正就是做不出来
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5楼2013-01-21 21:48:50
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 专家考核, 辛苦 2013-01-23 16:01:40
觉的你样品提取的有问题，或者确实药物将DNA降解了，还有，从你泳道口的残痕判断，从你加药开始的几个条带就有问题，加样孔残留过多，上下贯穿的黑条带，排除电泳问题的话，应该是DNA不规则碎片，各种长度都有，所以有长的带，后面随药物浓度加大，似乎dna完全被降解，跑出泳道了，

建议重新提取样品，采用新的试剂体系和电泳体系，如果还是同样问题，很可能你的药不止嵌合DNA，而且是将其降解，药物浓度越大，降解越彻底。

不知道其它虫友怎么解释
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6楼2013-01-22 14:20:34
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
药品干净吗,会不会把你的DNA降解了？？
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shine
7楼2013-01-22 16:07:03
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porphybaby

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cdl007 at 2013-01-22 14:20:34
觉的你样品提取的有问题，或者确实药物将DNA降解了，还有，从你泳道口的残痕判断，从你加药开始的几个条带就有问题，加样孔残留过多，上下贯穿的黑条带，排除电泳问题的话，应该是DNA不规则碎片，各种长度都有，所以 ...

我今天留意了一下。

发现是我药物浓度高的时候，它会让DNA发生沉淀的现象。

我直接可以在上样孔中看到那些有色的颗粒，它们是进不了胶的，只有溴酚蓝那些才在走，其他的电泳完了还依然在孔里，在孔中可以看到那些加了药物后的黄黄绿绿的沉淀。而银染之后 就整个泳道是干干净净的 什么都没有

但是 我后来降低药物浓度再做了 发现还是不行 它虽然是有条带跑出来 但是 依然是完全大拖尾 从孔中一直拖到前沿 没有形成 规整的 一个个的 条带
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8楼2013-01-22 23:46:13
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

看你后面的意思还是有大拖尾，我觉的还是降解，，，

不过你有没有跑分辨低一点的琼脂糖凝胶电泳？琼脂糖那个不能出条带的话，百分百降解
琼脂糖的能出条带的话就麻烦了，
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9楼2013-01-23 17:21:40
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porphybaby

金虫 (正式写手)
再试试看吧，实在不行的话我就干脆不做这个实验了。
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10楼2013-01-23 22:14:17
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