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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ssDNA形成dsDNA
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匿名

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1楼 2011-10-20 08:47:10
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good！鼓励应助！ 2011-10-22 21:25:13
我很囧(金币+2): 2011-10-24 08:19:31
至于有没有形成双链的DNA，可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳验证。一般情况下，完全互补的ssDNA等比例混合后，在高于Tm值的温度下孵育几分钟，然后缓慢冷却到室温。
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低调务实！
2楼2011-10-22 19:50:34
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likeyangff

木虫 (初入文坛)
高于TM温度，不就解链的吗？
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3楼2011-10-24 20:35:00
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匿名

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4楼2011-10-24 20:48:50
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likeyangff

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我很囧 at 2011-10-24 20:48:50:
所以叫退火啊。呵呵

杂交反应一般需要在振摇条件下进行吗？
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5楼2011-10-25 08:52:42
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xiaojuan.yang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-10-28 15:27:43
DNA中的G很容易淬灭FAM荧光，所以说荧光增大应该不是DNA的影响结果，我个人认为是加入互补链DNA后溶液的pH值升高导致的，希望能帮助到你。
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6楼2011-10-27 15:17:09
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匿名

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7楼2011-10-27 21:12:04
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610952845

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by likeyangff at 2011-10-24 20:35:00:
高于TM温度，不就解链的吗？

请问如何确定TM温度？谢谢！
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8楼2011-11-02 19:41:49
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我很囧(金币+8): 2011-11-12 15:18:15
你就这样做，将FAM标记的ssDNA和完全互补的ssDNA等比例混合，烧壶开水，倒到烧杯，将装有DNA的EP管放到浮漂上丢到烧杯中，让其缓慢冷却到室温，这样就杂交效果会很好。验证的话，可以用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，相同长度的ssDNA和dsDNA的位置不一样，你这个由于带了FAM修饰，都不需要染胶。
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低调务实！
9楼2011-11-04 15:44:55
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liuhaiyun

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2012-03-14 21:12:09
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