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匿名

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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good!鼓励应助! 2011-10-22 21:25:13
我很囧(金币+2): 2011-10-24 08:19:31
至于有没有形成双链的DNA,可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳验证。一般情况下,完全互补的ssDNA等比例混合后,在高于Tm值的温度下孵育几分钟,然后缓慢冷却到室温。
低调务实!
2楼2011-10-22 19:50:34
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likeyangff

木虫 (初入文坛)

高于TM温度,不就解链的吗?
3楼2011-10-24 20:35:00
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匿名

用户注销 (小有名气)

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4楼2011-10-24 20:48:50
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likeyangff

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 我很囧 at 2011-10-24 20:48:50:
所以叫退火啊。呵呵

杂交反应一般需要在振摇条件下进行吗?
5楼2011-10-25 08:52:42
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xiaojuan.yang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-10-28 15:27:43
DNA中的G很容易淬灭FAM荧光,所以说荧光增大应该不是DNA的影响结果,我个人认为是加入互补链DNA后溶液的pH值升高导致的,希望能帮助到你。
6楼2011-10-27 15:17:09
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匿名

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7楼2011-10-27 21:12:04
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610952845

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by likeyangff at 2011-10-24 20:35:00:
高于TM温度,不就解链的吗?

请问如何确定TM温度?谢谢!
8楼2011-11-02 19:41:49
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我很囧(金币+8): 2011-11-12 15:18:15
你就这样做,将FAM标记的ssDNA和完全互补的ssDNA等比例混合,烧壶开水,倒到烧杯,将装有DNA的EP管放到浮漂上丢到烧杯中,让其缓慢冷却到室温,这样就杂交效果会很好。验证的话,可以用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,相同长度的ssDNA和dsDNA的位置不一样,你这个由于带了FAM修饰,都不需要染胶。
低调务实!
9楼2011-11-04 15:44:55
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liuhaiyun

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

10楼2012-03-14 21:12:09
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