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我很囧

铁虫 (小有名气)

[求助] ssDNA形成dsDNA

最近试验中,单链DNA(标记FAM)与互补链形成dsDNA后荧光值升高了一倍左右,请问为何这样?不知道是否形成了所要的双链。
怎样条件:如反应多久或怎么操作下才能使两条互补单链形成双链较完全?如何简单验证双链的形成?请高手指点。
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xiaojuan.yang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-10-28 15:27:43
DNA中的G很容易淬灭FAM荧光,所以说荧光增大应该不是DNA的影响结果,我个人认为是加入互补链DNA后溶液的pH值升高导致的,希望能帮助到你。
6楼2011-10-27 15:17:09
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更深的蓝

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wanhscn(金币+3): Good!鼓励应助! 2011-10-22 21:25:13
我很囧(金币+2): 2011-10-24 08:19:31
至于有没有形成双链的DNA,可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳验证。一般情况下,完全互补的ssDNA等比例混合后,在高于Tm值的温度下孵育几分钟,然后缓慢冷却到室温。
低调务实!
2楼2011-10-22 19:50:34
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likeyangff

木虫 (初入文坛)

高于TM温度,不就解链的吗?
3楼2011-10-24 20:35:00
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我很囧

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by likeyangff at 2011-10-24 20:35:00:
高于TM温度,不就解链的吗?

所以叫退火啊。呵呵
4楼2011-10-24 20:48:50
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