应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gel-shift蛋白结合DNA的问题
241/3返回列表123下一页
查看: 2928  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yuxia82012

木虫 (著名写手)

[求助] gel-shift蛋白结合DNA的问题

最近做gelshift研究蛋白与DNA的结合，在用不同量得蛋白与DNA反应后，跑5%的非变性聚丙烯酰胺凝胶，扫图见下，这个结果看出来是结合了，但是感觉有点不正常，主要是跑完后，在同样的曝光度下，蛋白量加的多的泳道DNA信号很弱，加大曝光度后可以明显看见上面有结合，不知道这是不是有问题，怎么证明这个蛋白是特异结合这段DNA而不是随便什么DNA都能结合呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

微纳材料

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
在等待中涅槃重生
1楼 2011-06-02 21:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)
自己顶一下，别沉了
回复此楼
在等待中涅槃重生
2楼2011-06-03 09:43:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱mm

木虫 (著名写手)
我想请教一下，你的蛋白和DNA是怎么结合的？氨基羧基，还是适体结合？两者结合后，结合了蛋白的DNA跑的慢，而没有结合的跑的快，是这个原理吗？
赞一下 回复此楼
木虫给力！
3楼2011-06-23 09:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-06-23 14:40:19
引用回帖:
Originally posted by 爱mm at 2011-06-23 09:05:30:
我想请教一下，你的蛋白和DNA是怎么结合的？氨基羧基，还是适体结合？两者结合后，结合了蛋白的DNA跑的慢，而没有结合的跑的快，是这个原理吗？

应该是适体结合，结合后的复合体跑得慢，就是这个原理
赞一下(1人) 回复此楼
在等待中涅槃重生
4楼2011-06-23 10:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuzuobin125

铜虫 (小有名气)
不懂得这方面的知识，楼主能把这种实验的目的和用途说一说嘛，实在是想多学习一点东西，
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-23 13:42:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)
我做的是一个调控基因机理的研究，也就是这个调控蛋白通过结合到特异基因的启动子区域来调控下游基因的表达，这个实验就是测试这个调控蛋白是否真的和预测的启动子基因序列有结合作用的
赞一下 回复此楼
在等待中涅槃重生
6楼2011-06-23 15:13:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhcosa

金虫 (小有名气)
加一段不相干的DNA做阴性对照行吗？如果只能楼主的目标DNA结合，而不结合其他DNA，那就说明特异性啦
赞一下 回复此楼
7楼2011-06-23 16:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)
首先看有没有结合，然后看是否特异，我一般是加不标记的这段DNA进行竞争，再做一个不相干DNA竞争，这样就能看出来是否特异了
赞一下 回复此楼
在等待中涅槃重生
8楼2011-06-23 19:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilirong2009

铜虫 (小有名气)
普遍性结合
蛋白质与DNA的主链骨架接触，多数碱性或中性侧链与
磷酸二酯键的氧接触，短的极性侧链和-NH与DNA骨架接触提
供更多的立体接触特异性。
特异性结合
蛋白质识别DNA的特定序列，与碱基直接接触：直接氢
键、水分子介导氢键、疏水接触，多数发生在大沟内(碱基顺序
表面)。
这样特异结合的文章是有的，我在电脑里面找不到放哪里了，你自己找找。
赞一下 回复此楼
9楼2011-06-25 14:42:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13808906306

金虫 (正式写手)
楼主，问个问题你制非变性聚丙烯酰胺凝胶时加甘油了吗？配方能否透露一下，最近做的emsa老不出现条带，有点抓狂
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-23 00:24:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuxia82012 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂285 +3 吕仔龙 2026-02-28 3/150 2026-03-01 07:59 by ms629
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 284求调剂 +4 天下熯 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:13 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[基金申请] 面上可以超过30页吧？ +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭