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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gel-shift蛋白结合DNA的问题
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 13808906306 at 2012-09-22 11:24:52
楼主，问个问题你制非变性聚丙烯酰胺凝胶时加甘油了吗？配方能否透露一下，最近做的emsa老不出现条带，有点抓狂

时间太久了，我记得我应该全是按照分子克隆上写的配的
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在等待中涅槃重生
21楼2013-04-27 05:03:20
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bingrener

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxia82012 at 2011-06-03 09:43:16
自己顶一下，别沉了

楼主这个体系里面加非特异性竞争DNA了吗，鲑精DNA或者polyDIDC都可以，如果加了50倍或100倍的竞争DNA还是有明显的结合，那应该就是真的了。然后再做DNA足迹（DNase I footprinting）可以找到具体的结合位点。DNA足迹自己做可能不太好做，需要专门的平台，一般实验室都没有，这个可以去找公司。我们实验室是在上海吐露港生物科技有限公司做的，他们直接给我们做好能发表的图，现在文章已经发了。楼主可以看一下，
J. Bacteriol.-2013-Wang-2595-602
他们公司网址：www.tolobio.com      
电话：400-032-6070           邮箱：support@tolobio.com
直接打电话跟他们联系就行，发邮件也行。
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22楼2015-05-20 09:45:07
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s1523466

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 13808906306 at 2012-09-23 00:24:52
楼主，问个问题你制非变性聚丙烯酰胺凝胶时加甘油了吗？配方能否透露一下，最近做的emsa老不出现条带，有点抓狂

你好，请问你的EMSA现在做出来了么，有没有跑胶的配方，可以请教一下吗
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23楼2018-07-02 10:28:51
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s1523466

新虫 (小有名气)
可否请教一下楼主，采用的是什么成像方法，蛋白和探针的终浓度大概是多少，电泳缓冲液采用的是是什么缓冲液呢
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24楼2018-07-12 10:52:00
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