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yuxia82012木虫 (著名写手)
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gel-shift蛋白结合DNA的问题
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最近做gelshift研究蛋白与DNA的结合，在用不同量得蛋白与DNA反应后，跑5%的非变性聚丙烯酰胺凝胶，扫图见下，这个结果看出来是结合了，但是感觉有点不正常，主要是跑完后，在同样的曝光度下，蛋白量加的多的泳道DNA信号很弱，加大曝光度后可以明显看见上面有结合，不知道这是不是有问题，怎么证明这个蛋白是特异结合这段DNA而不是随便什么DNA都能结合呢？ |
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楼主这个体系里面加非特异性竞争DNA了吗，鲑精DNA或者polyDIDC都可以，如果加了50倍或100倍的竞争DNA还是有明显的结合，那应该就是真的了。然后再做DNA足迹（DNase I footprinting）可以找到具体的结合位点。DNA足迹自己做可能不太好做，需要专门的平台，一般实验室都没有，这个可以去找公司。我们实验室是在上海吐露港生物科技有限公司做的，他们直接给我们做好能发表的图，现在文章已经发了。楼主可以看一下， J. Bacteriol.-2013-Wang-2595-602 他们公司网址：www.tolobio.com 电话：400-032-6070 邮箱：support@tolobio.com 直接打电话跟他们联系就行，发邮件也行。 |
22楼2015-05-20 09:45:07
yuxia82012
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