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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » gel-shift蛋白结合DNA的问题
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

[求助] gel-shift蛋白结合DNA的问题

最近做gelshift研究蛋白与DNA的结合，在用不同量得蛋白与DNA反应后，跑5%的非变性聚丙烯酰胺凝胶，扫图见下，这个结果看出来是结合了，但是感觉有点不正常，主要是跑完后，在同样的曝光度下，蛋白量加的多的泳道DNA信号很弱，加大曝光度后可以明显看见上面有结合，不知道这是不是有问题，怎么证明这个蛋白是特异结合这段DNA而不是随便什么DNA都能结合呢？
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在等待中涅槃重生
1楼 2011-06-02 21:24:04
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bingrener

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxia82012 at 2011-06-03 09:43:16
自己顶一下，别沉了

楼主这个体系里面加非特异性竞争DNA了吗，鲑精DNA或者polyDIDC都可以，如果加了50倍或100倍的竞争DNA还是有明显的结合，那应该就是真的了。然后再做DNA足迹（DNase I footprinting）可以找到具体的结合位点。DNA足迹自己做可能不太好做，需要专门的平台，一般实验室都没有，这个可以去找公司。我们实验室是在上海吐露港生物科技有限公司做的，他们直接给我们做好能发表的图，现在文章已经发了。楼主可以看一下，
J. Bacteriol.-2013-Wang-2595-602
他们公司网址：www.tolobio.com      
电话：400-032-6070           邮箱：support@tolobio.com
直接打电话跟他们联系就行，发邮件也行。
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22楼2015-05-20 09:45:07
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
自己顶一下，别沉了
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在等待中涅槃重生
2楼2011-06-03 09:43:16
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爱mm

木虫 (著名写手)
我想请教一下，你的蛋白和DNA是怎么结合的？氨基羧基，还是适体结合？两者结合后，结合了蛋白的DNA跑的慢，而没有结合的跑的快，是这个原理吗？
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木虫给力！
3楼2011-06-23 09:05:30
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-06-23 14:40:19
引用回帖:
Originally posted by 爱mm at 2011-06-23 09:05:30:
我想请教一下，你的蛋白和DNA是怎么结合的？氨基羧基，还是适体结合？两者结合后，结合了蛋白的DNA跑的慢，而没有结合的跑的快，是这个原理吗？

应该是适体结合，结合后的复合体跑得慢，就是这个原理
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在等待中涅槃重生
4楼2011-06-23 10:40:16
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