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yuxia82012

木虫 (著名写手)

[求助] gel-shift蛋白结合DNA的问题

最近做gelshift研究蛋白与DNA的结合,在用不同量得蛋白与DNA反应后,跑5%的非变性聚丙烯酰胺凝胶,扫图见下,这个结果看出来是结合了,但是感觉有点不正常,主要是跑完后,在同样的曝光度下,蛋白量加的多的泳道DNA信号很弱,加大曝光度后可以明显看见上面有结合,不知道这是不是有问题,怎么证明这个蛋白是特异结合这段DNA而不是随便什么DNA都能结合呢?
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在等待中涅槃重生
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

首先看有没有结合,然后看是否特异,我一般是加不标记的这段DNA进行竞争,再做一个不相干DNA竞争,这样就能看出来是否特异了
在等待中涅槃重生
8楼2011-06-23 19:16:06
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

自己顶一下,别沉了
在等待中涅槃重生
2楼2011-06-03 09:43:16
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爱mm

木虫 (著名写手)

我想请教一下,你的蛋白和DNA是怎么结合的?氨基羧基,还是适体结合?两者结合后,结合了蛋白的DNA跑的慢,而没有结合的跑的快,是这个原理吗?
木虫给力!
3楼2011-06-23 09:05:30
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-06-23 14:40:19
引用回帖:
Originally posted by 爱mm at 2011-06-23 09:05:30:
我想请教一下,你的蛋白和DNA是怎么结合的?氨基羧基,还是适体结合?两者结合后,结合了蛋白的DNA跑的慢,而没有结合的跑的快,是这个原理吗?

应该是适体结合,结合后的复合体跑得慢,就是这个原理
在等待中涅槃重生
4楼2011-06-23 10:40:16
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