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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教为什么我的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后条带有些弥散！
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l20065091

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教为什么我的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后条带有些弥散！

我是做微卫星标记的，用的8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，跑完后条带都有些弥散，但是maker不弥散，请问是什么问题，我恒定电压跑的，一般跑一个小时多一点，谢谢指教！！
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1楼 2012-08-15 10:36:51
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-15 15:37:17
l20065091: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-15 17:22:55
跟跑胶没有关系。楼主把循环数降低一些，把退火温度提高一点就好了。
主带上面有非特异带，说明你的循环数过多，因为SSR是短而重复，因此，循环数过多的话，如果PCR某一成分用完，PCR产物就变性，复性，容易形成滑链结合，因此出现非特异带，因而减少循环数可改善这种情况。
而主带弥散，说明退火温度偏低，或者模板浓度太高或者镁离子浓度过高，可以加入少量二甲基亚砜提高扩增特异性。
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2楼2012-08-15 13:05:29
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
电压多少？电压高了会出现弥散
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3楼2012-08-15 16:36:19
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

电压多少？电压高了会出现弥散
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4楼2012-08-15 16:37:15
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l20065091

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小河弯弯07 at 2012-08-15 16:37:15
电压多少？电压高了会出现弥散

电压300V跑的呢！！
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5楼2012-08-21 10:39:36
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小河弯弯07

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by l20065091 at 2012-08-21 10:39:36
电压300V跑的呢！！...

我原来跑160V都拖尾很严重，最后调到110V勉强可以。你可以按梯度调低电压试试，找到比较合适的电压。
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6楼2012-08-21 11:47:26
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syy216

新虫 (初入文坛)
PCR产物浓度高了，上样量减少。我们跑250V 没一点问题
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7楼2012-10-16 16:08:43
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wangtao89hf

新虫 (初入文坛)
请问楼主，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，你们用的那家试剂公司的maker要SDS——PAGE的maker不能用吗，另外哪家公司有非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的切胶回收试剂盒，多谢。
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8楼2013-04-28 18:02:29
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hutuyao

新虫 (初入文坛)
我刚跑的8%的胶，用165V的电压跑两个小时，拖尾现象很严重是怎么回事呢
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9楼2014-07-15 20:07:25
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hutuyao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-15 13:05:29
跟跑胶没有关系。楼主把循环数降低一些，把退火温度提高一点就好了。
主带上面有非特异带，说明你的循环数过多，因为SSR是短而重复，因此，循环数过多的话，如果PCR某一成分用完，PCR产物就变性，复性，容易形成滑 ...

想问一下，我跑8%的非变性聚丙烯酰胺胶，用165V电压跑2小时，拖尾现象严重是怎么回事啊
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10楼2014-07-15 20:09:36
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