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请教为什么我的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后条带有些弥散！
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我是做微卫星标记的，用的8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，跑完后条带都有些弥散，但是maker不弥散，请问是什么问题，我恒定电压跑的，一般跑一个小时多一点，谢谢指教！！ |
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4楼2012-08-15 16:37:15
chenguestc
木虫 (职业作家)
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- 应助: 576 (博士)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-15 15:37:17
l20065091: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-08-15 17:22:55
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跟跑胶没有关系。楼主把循环数降低一些，把退火温度提高一点就好了。 主带上面有非特异带，说明你的循环数过多，因为SSR是短而重复，因此，循环数过多的话，如果PCR某一成分用完，PCR产物就变性，复性，容易形成滑链结合，因此出现非特异带，因而减少循环数可改善这种情况。 而主带弥散，说明退火温度偏低，或者模板浓度太高或者镁离子浓度过高，可以加入少量二甲基亚砜提高扩增特异性。 |
2楼2012-08-15 13:05:29
3楼2012-08-15 16:36:19
5楼2012-08-21 10:39:36
50