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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA聚丙烯酰胺凝胶
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花

[求助] DNA聚丙烯酰胺凝胶

哪位大侠，能不能帮下忙啊！非变性聚丙烯酰胺凝胶跑DNA电泳,指示剂一直在孔里?哪里出现问题了？
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1楼2012-11-26 20:03:08
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回帖置顶 ( 共有1个 )

傻子

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励分享经验 2012-11-28 13:56:33
qiuzhileipo: 回帖置顶 2012-11-30 13:31:07
非变性的PAGE，DNA不用变性，使用6 X loading buffer就可以了。
实验中除了需要按方法做外，注意几点：
1. 电源接通后，观察是否有气泡产生，判断是否通电开始电泳
2. 凝胶过程中，需将胶充分混匀后加入胶版中，并保证足够的凝胶时间
3. 指示剂在胶孔中，不知你是否做过银染看DNA是否迁移下来
4. 电泳前，需将胶孔中未凝集的胶吹出
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1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。
12楼2012-11-28 12:38:28
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普通回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
（1）pH不对，我是用TBE buffer,
  (2)  胶的比例不对
（3） 电源问题？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2012-11-27 12:34:22
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的指示剂里面是些什么东西？
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低调稳重务实内敛---------------残
3楼2012-11-27 13:01:54
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CXL19880406

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
指示剂是什么呢？是marker么？如果是marker的话没加变性buffer吧，另外注意变性buffer的配方，祝实验成功～
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4楼2012-11-27 13:51:04
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是指示剂的问题吧？
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5楼2012-11-27 14:07:44
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
3楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-11-27 13:01:54
你的指示剂里面是些什么东西？

指示剂是跟DNA marker在一块的6xloading buffer。
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6楼2012-11-27 19:09:38
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
4楼: Originally posted by CXL19880406 at 2012-11-27 13:51:04
指示剂是什么呢？是marker么？如果是marker的话没加变性buffer吧，另外注意变性buffer的配方，祝实验成功～

是跟marker一起送过来的6xloading buffer。还要自己配么？如果需要配，配方是什么？谢谢啦！
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7楼2012-11-27 19:11:51
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qiuzhileipo

木虫 (正式写手)

生如夏花
引用回帖:
5楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-27 14:07:44
应该是指示剂的问题吧？

是跟marker一起送过来的6xloading buffer。还要自己配么？如果需要配，配方是什么？谢谢啦！
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8楼2012-11-27 19:12:02
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by qiuzhileipo at 2012-11-27 19:09:38
指示剂是跟DNA marker在一块的6xloading buffer。...

你重新配一下电泳液，可能是你电泳液有问题！配胶的也要哦！
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低调稳重务实内敛---------------残
9楼2012-11-27 19:20:21
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CXL19880406

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by qiuzhileipo at 2012-11-27 19:11:51
是跟marker一起送过来的6xloading buffer。还要自己配么？如果需要配，配方是什么？谢谢啦！...

跑琼脂糖胶才用6xloading buffer.变性buffer：980μl去离子甲酰胺+20μl 0.5M EDTA，加入二甲苯氰至产生颜色即可～marker可不变性，PCR产物混合此物后需变性3min。祝实验成功～
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10楼2012-11-28 08:50:05
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