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有木有人知道“分离相似分子量的DNA分子的方法＂呢？
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| 本人在实验中用通用引物PCR出来了混合样中的多个相同分子量DNA（相同长度bp）的，通过电泳只是一个条带，所以将条带切胶回收后连接载体导入大肠杆菌，挑选单一菌落进行扩繁以分离出相同分子量但不同序列的DNA分子，但是该过程有些复杂，有木有知道简便方法可以分离相同分子量的DNA的呢？谢谢 |
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2楼2011-11-09 21:22:52
3楼2011-11-09 22:52:39
4楼2011-12-15 20:16:06
5楼2011-12-15 22:51:41
【答案】应助回帖
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西瓜(金币+3): Good! 2011-12-15 23:45:11
西瓜(金币+3): Good! 2011-12-15 23:45:11
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denaturing gradient gel electrophoresis;DGGE 随着电泳凝胶中的变性剂浓度的增大，由双链DNA分子变性形成的单链分子的电泳迁移率发生变化。 双链DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其迁移行为决定于其分子大小和电荷。不同长度的DNA 片段能够被区分开，但同样长度的DNA 片段在胶中的迁移行为一样，因此不能被区分。DGGE/TGGE 技术在一般的聚丙烯酰胺凝胶基础上，加入了变性剂（尿素和甲酰胺）梯度，从而能够把同样长度但序列不同的DNA 片段区分开来。一个特定的DNA 片段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域(meltingdomain, MD)和解链行为(melting behavior) 。一个几百个碱基对的DNA 片段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成。  当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度时，该区域这一段连续的碱基对发生解链。当浓度度再升高依次达到各其他解链区域浓度时，这些区域也依次发生解链。直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后，最高的解链区域也发生解链，从而双链DNA 完全解链。 |
6楼2011-12-15 22:52:44