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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 同样长度的单链DNA与双链DNA为什么跑聚丙烯酰胺变性胶，条带会出现在不同的位置
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jiangcheng14

金虫 (小有名气)

[求助] 同样长度的单链DNA与双链DNA为什么跑聚丙烯酰胺变性胶，条带会出现在不同的位置 已有2人参与

我用聚丙烯酰胺变性胶跑DNA,样品有单链的DNA,长度约75nt，双链DNA,长度75bp，是由前面的单链DNA与它反向互补的单链通过退火得到的，但我跑胶为什么它们跑出来不在一个高度上，双链的还跑得更快些，为什么？跑胶前我都把它们95度5min，然后放冰上5min后上样的，制胶时胶里加了尿素，上样前的loading里面有甲酰胺，照理说，双链会变成单链，应该和单链的跑在相同的高度，但是为什么会不一样，另外我跑胶时用的150伏电压，大概跑了40分钟
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1楼 2013-06-05 10:46:36
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诸葛小汐

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-08 12:05:33
单链的空间构象和双链是有区别的所以同样长度的单双链在聚丙烯酰里面所受到的阻力是不一样的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-06-06 23:54:30
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jiangcheng14

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 诸葛小汐 at 2013-06-06 23:54:30
单链的空间构象和双链是有区别的所以同样长度的单双链在聚丙烯酰里面所受到的阻力是不一样的

我跑的是变性胶，双链会打开成单链啊
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3楼2013-06-07 08:55:26
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
变性胶双链会打开的，是不是楼主胶制备的不好，尾毛双链没有打开啊？
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4楼2013-06-07 09:29:23
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jiangcheng14

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-06-07 09:29:23
变性胶双链会打开的，是不是楼主胶制备的不好，尾毛双链没有打开啊？

胶应该没问题啊，跑了几次都是这样，而且奇怪的是，双链的怎么还跑得快一些
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5楼2013-06-07 14:38:13
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诸葛小汐

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiangcheng14 at 2013-06-07 14:38:13
胶应该没问题啊，跑了几次都是这样，而且奇怪的是，双链的怎么还跑得快一些...

双链是跑的比单链快…你做的什么？SSCP麽？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-06-07 23:17:33
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jiangcheng14

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 诸葛小汐 at 2013-06-07 23:17:33
双链是跑的比单链快…你做的什么？SSCP麽？
...

sscp是什么？我跑的是尿素page变性胶啊
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7楼2013-06-08 09:45:06
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该是DNA双链没有变性解开成单链，确定跑胶前，95度变性时样品里加的是变性胶loading buffer吗？
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8楼2013-12-07 14:53:27
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xiaosu318

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

单链DNA可以做聚丙烯酰胺凝胶电泳吗
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9楼2014-02-21 15:45:46
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意孤城_

金虫 (正式写手)
你的双链DNA是环状的吗？如果环状的就不难解释了
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10楼2014-02-22 15:45:37
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